Enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas mediante separación de fases con detergente no iónico

Resumen

Fuente: Armbruster, K. M., Meredith, T. C. Enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas y preparación de lipopéptidos N-terminales para la determinación estructural por espectrometría de masas. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra el enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas utilizando un detergente no iónico que se somete a separación de fases al calentarse. A través de cambios secuenciales de temperatura y pasos de centrifugación, las lipoproteínas se dividen selectivamente en la fase detergente, mientras que los contaminantes no lipoproteicos se eliminan. Las lipoproteínas enriquecidas se precipitan, se lavan y se vuelven a suspender para aplicaciones posteriores.

Protocolo

1. Enriquecimiento de lipoproteínas mediante partición de fase Triton X-114 (TX-114)

1. Complemente el lisado bacteriano con tensioactivo TX-114 hasta una concentración final del 2% (vol/vol) añadiendo un volumen igual de tensioactivo al 4% (vol/vol) en solución salina tamponada con Tris/ácido etilendiaminotetraacético (TBSE) helado e incube en hielo durante 1 h, mezclando por inversión cada ~15 min.
   NOTA: Cuando se enfríen, el sobrenadante y el tensioactivo serán miscibles.
2. Transfiera el tubo a un baño de agua a 37 °C e incube durante 10 min para inducir la separación de fases. Centrifugar la muestra a 10.000 x g durante 10 min a tem....

Materiales