Preparación de cultivo de Streptococcus mitis para estudios de interacción huésped-patógeno

Resumen

Fuente: Naji, A., et al. Estudio del estrés oxidativo causado por los estreptococos del grupo Mitis en Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

Este video demuestra el método para cultivar Streptococcus mitis en condiciones microaerofílicas utilizando extracto de levadura Todd-Hewitt, o medio de agar THY, para preparar cultivos bacterianos para estudios de interacción huésped-patógeno.

Protocolo

1. Preparación de estreptococos del grupo Mitis para la infección

1. Raspe las cepas deseadas de estreptococos en el agar THY (extracto de levadura Todd-Hewitt) de 100 mm x 15 mm (si las placas se almacenaron a 4 ° C, precaliente las placas a 37 ° C antes de rayar las cepas respectivas), luego incube las placas a 37 ° C durante la noche (~ 18 h) en un frasco de velas que proporcione un ambiente microaerofílico para el crecimiento de los estreptococos (las placas rayadas se pueden almacenar durante una semana a 4 ° C).
2. Para propagar aislados clínicos de estreptococos, use agar tríptico de sangre de soja. Incubar las placas a 37 °C en un tarro de velas durante la noche (~18 h).
3. Al día siguiente, retire los platos del frasco de velas y recoja colonias aisladas con un lazo estéril. Inocular 15 mL de tubos cónicos estériles que contengan 2 mL de caldo THY. Para propagar aislados clínicos de estreptococos, complemente el caldo THY con 5% v / v de sangre de oveja. Cierre bien los tapones e incube los tubos a 37 °C en condiciones estáticas.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caldo BD Bacto Todd Hewitt	Fisher Scientific	DF0492-17-6
Extracto de levadura	Fisher Scientific	BP1422-500
Pipetas serológicas de poliestireno desechables 10 mL	Fisher Scientific	07-200-574
Pipetas serológicas de poliestireno desechables 25 mL	Fisher Scientific	07-200-575
Placas de Petri bacteriológicas Falcon con tapa (35 mm x 10 mm)	Fisher Scientific	08-757-100A
Placa de Petri con tapa transparente (60 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875713A
Placas de Petri con tapa transparente (100 mm x 15 mm)	Fisher Scientific	FB0875712
S. mitis ATCC 49456
Agar-agar