Cultivo de Haemophilus influenzae no tipificable

Resumen

Fuente: Venuprasad, K. et. al., Administración intratraqueal de Haemophilus influenzae en modelos de ratón para estudiar la inflamación de las vías respiratorias. J. Vis. Exp. (2016)

Este video demuestra el cultivo de Haemophilus influenzae no tipificable y la preparación de un inóculo estandarizado por dosis para estudios posteriores de colonización o infección.

Protocolo

1. Cultivo de Haemophilus influenzae no tipificable (NTHi) y preparación del inóculo

1. Colocar NTHi en una placa de agar chocolate y mantener la placa boca abajo en una incubadora de_CO2 humidificada durante la noche a 37 °C y 5% de_CO2. Al día siguiente, cultive las bacterias en caldo de infusión de cerebro y corazón. Luego, agregue 1 ml del caldo en un tubo estéril de 1,5 ml.
2. Centrifugar a 4.000 x g durante 5 min a temperatura ambiente. A continuación, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento en 1 ml de solución salina estéril 1x tamponada con fosfato (PBS). Repita este paso una vez.
3. Transfiera 100 μl de la solución resuspendida a 900 μl de 1x PBS y mida la absorbancia del cultivo diluido a una longitud de onda de 600 nm en un espectrofotómetro.
4. Determinar la viabilidad y las unidades formadoras de colonias (UFC) del inóculo cultivando diluciones seriadas 1:10 en placas de agar chocolate e incubando durante la noche a 37 °C y 5% de CO₂.
5. En función de la viabilidad y las UFC determinadas en el paso anterior, ajustar el inóculo a una concentración final de 20 x 10⁶ UFC/ml.

Materiales