Motilidad deslizante en filamentos de Phormidium lacuna

Resumen

Fuente: Weber, N., et al., Transformación natural, expresión de proteínas y crioconservación de la cianobacteria filamentosa Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra el procedimiento para evaluar la motilidad de deslizamiento en la laguna de Phormidium homogeneizando los cultivos de filamentos para crear una suspensión uniforme, preparando una configuración de ensayo en placa de Petri sobre un portaobjetos de microscopio y visualizando el movimiento del filamento.

Protocolo

1. Ensayo para movimiento en medio líquido
   1. Para la observación directa de la motilidad, transfiera 8 ml de medio que contenga P. lacuna a una placa de Petri de 6 cm. Espere unos minutos hasta que la muestra alcance la temperatura ambiente, luego cubra la placa de Petri con papel de celofán.
   2. Coloque un portaobjetos de microscopio en la mesa x-y de un microscopio estándar con una cámara. Encienda la luz del microscopio. Lo ideal es utilizar siempre los mismos ajustes eléctricos y ópticos para la iluminación. Mueve un objetivo de 4x o 10x en el camino de la luz.
   3. Coloque la placa de Petri encima del portaobjetos. Ajuste filamentos individuales o haces de filamentos por movimientos x, y y z de la mesa.
      NOTA: Debido a la disposición tridimensional, solo una parte de la sección relevante puede estar enfocada. La lámina de celofán permite ajustar el enfoque sin restricciones.
   4. Observe los movimientos de filamentos individuales o haces. Asegúrese de que la lente del objetivo no toque el líquido. Registre los movimientos de los filamentos con una cámara de microscopio estándar.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cristalería, diferente
Microscopio DM750	Zeiss
Cámara ocular MikrOkular Full HD	Bresser		para grabaciones time-lapse, acoplado a un miniordenador Raspberry Pi
Placas de Petri de poliestireno, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Software, URL
ImagenJ		Software para el procesamiento de imágenes (intensidades de píxeles, diámetro del círculo)
Medios de cultivo
Agua de mar artificial	0,41 M de NaCl, 53 mM de MgCl₂, 28 mM de Na₂SO₄, 10 mM de CaCl₂, 9 mM de KCl, 2,4 mM de NaHCO₃, 0,84 mM de KBr, 0,49 mM de H3BO₃, 90 μM de SrCl₂, 72 μM de NaF
f/2 -medio líquido	agua de mar artificial, solución de oligoelementos al 0,1 % (v/v), solución vitamínica al 0,05 % (v/v), NaNO₃ 0,88 mM, NaH₂PO₄ 36 μM
Solución de oligoelementos	0,36 mM de NaH₂PO₄, 12 μM de Na₂EDTA, 39 nM de CuSO₄, 26 nM de Na₂MoO₄, 77 nM de ZnSO₄, 42 nM de CoCl₂, 0,91 μM de MnCl₂
Solución vitamínica	0,3 μM de tiamina-HCl, 2,1 nM de biotina, 0,37 nM de cianocobalamina