Análisis histológicos y hematológicos para evaluar los efectos de Bacillus subtilis en ratas sometidas a estrés térmico

Resumen

Fuente: Sorokulova, I., et al. Prevención de los efectos adversos por estrés térmico en ratas por la cepa Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

Este vídeo presenta análisis histológicos y de microscopía hematológica utilizados para evaluar los efectos protectores de Bacillus subtilis en ratas expuestas al estrés térmico.

Protocolo

1. Análisis histológico

1. Extrae muestras de intestino delgado de cada rata experimental mediante procedimiento quirúrgico. Fijar muestras en el fijador de Bouin, inyecer parafina, preparar secciones de 6 μm y teñir secciones con hematoxilina y eosina utilizando procedimientos estándar.
2. Utiliza un sistema de microscopio de alta resolución para medir la altura de las vellosidades intestinales y el grosor total de la mucosa en cada muestra (aumento 100X). Analiza 4 muestras de cada rata y realiza al menos veinte mediciones en cada muestra. Resultados de Express en micrómetros.

2. Microscopía óptica de alta resolución de sangre

1. Utiliza una plataforma de aislamiento de vibraciones como base para el sistema de microscopio y la cámara de vídeo y el ordenador para grabar las imágenes en directo. Calibra las imágenes de prueba usando una diapositiva Richardson.
2. Coloca 7 μl de sangre recién extraída de cada rata sobre una lámina de vidrio, toma una fotograma, fotografía y registra diez fotogramas de imagen de 72 × 53,3^μm2 en cada muestra (aumento 1.700X).
3. Mide la concentración de las vesículas utilizando un software que proporciona imágenes ópticas de alta resolución y vista directa en tiempo real. Examina un mínimo de 20 fotogramas de imagen para cada condición experimental.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
El fijador de Bouin	Ciencias de la Microscopía Electrónica, Hatfield, PA, EE. UU.	15990
Diapositivas de prueba de Richardson	Ciencia de Microscopía Electrónica, Hatfield, PA, EE. UU.	80303
Cámara de vídeo Sony DXC-33	Sony
Sistema óptico de microscopio óptico	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Software Image-Pro Plus	Media Cybernetics, MD, EE. UU.