Ensayo de motilidad para comparar cepas de Vibrio cholerae utilizando cloruro de trifeniltetrazolio

Resumen

Fuente: Brumfield, K. D., et al. Técnicas de laboratorio utilizadas para mantener y diferenciar biotipos de aislados clínicos y ambientales de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo demuestra un ensayo de agar blando utilizando cloruro de trifeniltetrazolio para evaluar y comparar la motilidad de cepas de Vibrio cholerae visualizando la actividad metabólica a través de la formación de zonas rojas alrededor de células activamente migratorias.

Protocolo

1. Ensayo de motilidad
   1. Prepara cultivos nocturnos de cepas de Vibrio cholerae en caldo líquido LB (Luria-Bertani).
   2. Pastar 1,8 mL del cultivo nocturno durante 2 minutos por centrifugación (≥8.600 x g) en un tubo estéril de microcentrífuga de 2 mL y retirar el sobrenadante usando una pipeta. Resuspende la pelota celular en 1,8 mL de 1x PBS (solución salina tamponada con fosfato) pipeteando.
   3. Repite el procedimiento de lavado tres veces, seguido de una resuspensión final en 1,8 mL 1x PBS.
   4. Inocular las placas de agar de motilidad insertando una punzada inoculadora en el cultivo líquido lavado y pinchando verticalmente en el medio. Entre cada inoculación, esteriliza la punzada de alambre usando un mechero Bunsen y, al pinchar el agar, asegúrate de que la punzada no se doble, ya que esto puede alterar los resultados.
   5. Incubar las placas con la tapa hacia arriba durante 14 a 24 horas a 37 °C. Después de 14 horas, vigila de cerca las placas de motilidad para evitar el crecimiento excesivo de cultivos.

Materiales