Ensayo Voges-Proskauer para la diferenciación de biotipos de Vibrio cholerae

Resumen

Fuente: Brumfield, K. D., et al., Técnicas de laboratorio utilizadas para mantener y diferenciar biotipos de aislados clínicos y ambientales de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017).

Este vídeo demuestra la prueba Voges-Proskauer (VP) para diferenciar entre tres biotipos de Vibrio cholerae: clásico, tipo salvaje El Tor y variante El Tor. Cada cultivo se inocula en un medio que contiene glucosa, se incuba y se trata con α-naftol e hidróxido potásico para detectar la presencia de acetoína. Un color rojizo rosado, que indica una reacción VP positiva, solo se observa en el biotipo salvaje El Tor, distinguiéndolo de los tipos clásico y variante.

Protocolo

Ensayo Voges-Proskauer (VP)

1. Prepara cultivos nocturnos en caldo LB líquido.
2. Inocular 4 mL de caldo Voges-Proskauer rojo de metilo, o caldo MR-VP, pipeteando 10 μL de cultivo nocturno previamente preparado en un caldo MR-VP de 4 mL en un tubo de cultivo estéril e incubar con aireación en una incubadora shaker a 225 rpm durante 12 a 16 horas a 37 °C.
3. Añadir 150 μL de 5% (p/v) de α-naftol y 50 μL de KOH al 40% (p/v) a 1 mL de alícuotas de MR-VP durante la noche en tubos de cultivo estériles, respectivamente.
4. Formad un breve vórtice y dejad reposar a temperatura ambiente hasta 4 horas hasta que se produzca un cambio de color.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
MR-VP Broth	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
KOH	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-napthol	MP Biomedicina	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189