Extracción de ADN genómico basado en lisis térmica de una bacteria patógena

Resumen

Fuente: Gulla, S., et al. Análisis tándem-repetición multilocus de la bacteria patogénica de peces Yersinia ruckeri mediante PCR multiplex y electroforesis capilar. J. Vis. Exp. (2019).

Este protocolo extrae ADN genómico de Yersinia ruckeri suspendiendo colonias aisladas en agua ultrapura y aplicando calor para lisar las células. La centrifugación separa el sobrenadante que contiene ADN de los restos celulares, produciendo ADN plantilla adecuado para la genotipificación basada en PCR y el análisis epidemiológico.

Protocolo

1. Cultivo bacteriano y extracción de ADN genómico

1. Siembra cultivos puros de Y. ruckeri en cualquier tipo de agar adecuado (los autores usaron agar de sangre bovina al 5%) e incuba a 22 °C durante 1-2 días, o a 15 °C durante 3-4 días.
2. De cada placa de agar, se toma una colonia representativa con un lazo de inoculación y transfírela a tubos centrífugos de 1,5 mL que contienen 50 μL de agua ultrapurificada. Suspende, pon un vórtice brevemente e incuba durante 7 minutos en un bloque calefactor a 100 °C.
3. Centrifuga a 16.000 x g durante 3 minutos y utiliza una pipeta para transferir cuidadosamente el sobrenadante a un tubo de centrífuga....

Materiales