1. Supervivencia bacteriana tras condiciones de tránsito gastrointestinal in vitro
NOTA: Prepara fluidos de digestión simulados con las modificaciones descritas a continuación. Prepara todas las diluciones con agua ultrapura. Filtrar todas las soluciones mediante un filtro de 0,22 μm y realizar el procedimiento de digestión en condiciones estériles.
- Digestión oral:
- Colocar 3 mL de la comunidad bacteriana en un tubo estéril de 50 mL, mezclar con 3 mL de fluido salival simulado (SSF), que contenga en milimoles por litro (mmol L⁻¹): cloruro de potasio (KCl), 15,1; Fosfato monopotásico (KH₂PO₄), 3,7; Bicarbonato de sodio (NaHCO₃), 6,8; Cloruro de magnesio hexahidrato (MgCl₂·6H₂O), 0,5, carbonato de amonio [(NH₄)₂CO₃], 0,06; Ácido clorhídrico (HCl), 1.1; Cloruro de calcio dihidrato (CaCl₂·2H₂O), 0,75. Añade 75 U/mL de α-amilasa de saliva humana tipo IX-A y 2 g/L de mucina del estómago porcino (tipo II) al SSF.
- Incuba la mezcla durante 2 minutos a 37 °C y 100 rpm. Recoger una muestra de 2 mL para extracción de ADN y cuantificación por citometría de flujo (S1).
2. Digestión gástrica:
- Añadir 4 mL de líquido gástrico simulado (SGF), que contiene (en mmol L-1): KCl, 6,9; KH₂PO₄, 0,9; NaHCO₃, 25; Cloruro de sodio (NaCl), 47,2; MgCl₂·6H₂O, 0,1, (NH₄)₂CO₃, 0,5; HCl, 15,6; CaCl₂·2H₂O, 0,075. Además, el SGF contenía 2 g/L de mucina del estómago porcino (Tipo II).
- Mide el pH y ajusta a pH 3 con 1 molar (1 M) de HCl, si es necesario. Incubar a 37 °C y 100 rpm. Recoge una muestra de 2 mL (S2).
3. Digestión del intestino delgado:
- Añadir 4 mL de líquido intestinal simulado (SIF) que contiene (en mmol L-1): KCl, 6,8; KH₂PO₄, 0,8; NaHCO₃, 85; NaCl, 38,4; MgCl₂·6H₂O, 0,33; HCl, 8.4; CaCl₂·2H₂O, 0,3, al tubo digestivo.
- Ajusta a pH 7 con 1 M de hidróxido de sodio (NaOH), si es necesario. Incubar a 37 °C y 100 rpm. Recoge una muestra de 2 mL (S3).