Enriquecimiento selectivo y aislamiento de bacterias marinas degradadoras de petróleo a partir de muestras de agua de mar

Resumen

Fuente: Villela, H. D. M. , et al. Prospección de cepas microbianas para biorremediación y desarrollo probiótico para la investigación y preservación de metaorganismos. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra el aislamiento selectivo de bacterias marinas degradadoras del petróleo mediante el enriquecimiento de muestras de agua de mar en medios petrolíferos, permitiendo la recuperación de cepas puras con posibles aplicaciones en la biorremediación del petróleo crudo y la limpieza ambiental.

Protocolo

1. Recogida y almacenamiento de agua y coral para aislamiento microbiano

NOTA: Es esencial tomar las coordenadas y la temperatura de los sitios de muestreo. Si es posible, metadatos como la salinidad, el pH, la profundidad y la intensidad lumínica también pueden ayudar a encontrar enfoques de cultivo más precisos y a la futura interpretación de los datos. Para obtener resultados fiables, guarda las muestras durante el menor tiempo posible. Los microbiomas del agua/coral pueden cambiar considerablemente si las muestras no se mantienen a la temperatura adecuada y/o se almacenan durante largos periodos. Si el paso de aislamiento no se realiza inmediata....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Botella de almacenamiento de medios PYREX de 500 mL	thomas scientific/Corning	1743E20/1395-500	Usado para tomar muestras de agua.
Botellas aspiradoras de 500 mL	thomas scientific/Corning	1234B28/1220-2X	Se usaba para separar las fracciones de aceite.
Alicate de 6 pulgadas	thomas scientific/Restek	1173Y64/23033	Se usaba para cortar fragmentos de coral.
Agar-agar	Himedia	PCT0901-1KG	Antes hacía medios sólidos.
Caldo Haas de Bushnell	Himedia	M350-500G	Se utiliza como medio mínimo para ser complementado con fuentes de carbono.
Matraz Erlenmeyer	Thomas Scientific/DWK Ciencias de la Vida (Kimble)	4882H35/26500-125	Se usan para incubar macerados de coral con cuentas de vidrio.
Campana de flujo laminar			Necesitaba trabajar en condiciones estériles.
Luria Bertani Broth, molinero (Miller Luria Bertani Broth)	Himedia	M1245-1KG	Se usa como medio rico para cultivar bacterias.
Agar marino 2216 (Agar marino Zobell)	Himedia	M384-500G	Se usa como medio rico para cultivar bacterias.
Incubadora de Agitadores Orbitales			Se usa para incubar medios líquidos y aceite.
Incubadora de platos			Se usan para incubar placas.
Morcero y Mano de porcelana	Thomas scientific/United Scientific Supplies	1201U69/JMD150	Se usan para macerar fragmentos de coral.
Centrífuga refrigerada			Se usa para centrifugar cultivos bacterianos.
Espectrofotómetro			Se utiliza para medir la densidad óptica de cultivos bacterianos.
Kit de Purificación de ADN Genómico Wizard	Promega	A1120	Usado para la extracción de ADN de cepas microbianas.