Monitorización continua del ruido biológico en bacterias mediante microscopía de lapso de tiempo

Resumen

Fuente: Chaimovitz, E. A., et al. Medición continua del ruido biológico en Escherichia coli usando microscopía de lapso de tiempo. J. Vis. Exp. (2021)

Este vídeo demuestra la visualización en tiempo real del ruido biológico en E. coli siguiendo las fluctuaciones en la fluorescencia de GFP durante el crecimiento y la división bacteriana mediante microscopía de lapso de tiempo.

Protocolo

1. Preparación de la muestra para la imagen microscopica
   1. Quita el matraz del baño marea. Limpia el exterior del matraz y déjalo enfriar hasta la temperatura ambiente (25 °C).
      NOTA: Quita el frasco unos 3 minutos antes de que termine el temporizador.
   2. Vierte 3 mL del gel de forma constante sobre el perímetro de la placa en un movimiento circular. Déjalo solidificar unos minutos.
   3. Sella las placas con cinta y perfora varios agujeros con aguja de 25 G. Da la vuelta a todos los platos para evitar que la condensación del agua gotee sobre el gel.
   4. Incuba todos los platos a 4 °C durante 30 minutos para permitir la solidificación completa y evitar la mitosis celular.
      NOTA: Deja muestras a 4 °C para mediciones sucesivas, no más de un día.
   5. Enciende el microscopio siguiendo las instrucciones del fabricante.
   6. Encuentra el enfoque inicial usando el objetivo de menor amplificación y activa el sistema de enfoque automático (AFS).
   7. Usa aceite si es necesario, ahoga el objetivo con aceite y extiéndelo cuidadosamente moviendo la placa con un controlador de plataforma (no manualmente), y el AFS puede activarse de nuevo.
   8. Utiliza la sección transversal relativa en la dirección Z, siguiendo la sugerencia por defecto para las secciones transversales de paso Z.
      NOTA: Toma imágenes de campo luminoso cada 5 minutos y imágenes fluorescentes cada 20 minutos. A veces hay que ajustar el enfoque durante los primeros 30 minutos. Precalentar la caja incubadora del microscopio y el aceite, mientras refrigeras la muestra, suele ayudar a reducir la pérdida inicial de enfoque.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Plato de cristal de 35 mm	Mattek	P35G-0.170-14-C	Grosor correspondiente al objetivo del microscopio.
Agarosa	Lonza	5004	Preparación de LB
Eclipse Ti	Nikon		Microscopio invertido
Immersol 518F	Zeiss	4449600000000	Aceite de inmersión
Cinta de parapelícula	Bemis	PM-996	Referido como cinta en texto