In vitro Modelo de cultivo por lotes para imitar la fermentación del colon por microbiota intestinal humana

Resumen

Fuente: Ahmadi, S., et al. Un modelo de cultivo lotado in vitro para estimar los efectos de los regímenes intervencionistas sobre la microbiota fecal humana. J. Vis. Exp. (2019).

Este vídeo demuestra un método para modelar la fermentación microbiana intestinal incubando muestras de heces con fibra fermentable dietética bajo condiciones anaeróbias para estudiar la producción de metabolitos por microbiota intestinal.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recogida de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

CAUTELA: Consulte las Hojas de Datos de Seguridad de Materiales correspondientes y siga las instrucciones y directrices para la formación adecuada en Bioseguridad Nivel 2 (BSL-2). Sigue todos los pasos de cultivo según las normas estándar de bioseguridad y utiliza un armario BSL-2 en condiciones asépticas. Además, las muestras fecales de diferentes modelos y sujetos humanos pueden presentar un riesgo potencial de propagación de enfermedades transmitidas por microbianos. Busca ayuda médica inmediatamente en caso de cualquier lesión ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Bicarbonato de amonio	Sigma-Aldrich	217255
Sulfato de amonio	TGI	C2388	Nocivo
Dihidrato de cloruro de calcio	Sigma-Aldrich	C3306	Irritante
Cloruro cobaltoso hexahidrato	Sigma-Aldrich	255599
Dihidrato de cloruro cúprico	Acros orgánicos	2063450000	Tóxico, irritante
Cisteína-HCl	Sigma-Aldrich	C121800
D-biotina	Sigma-Aldrich	B4501
Ácido D-Pantoténico	Alfa Aesar	A16609
Dihidrato dihidrato de etilendediamina, tetraacetato	Biorad	1610729
DL-α-metilbutirato	Sigma-Aldrich	W271918
Sulfato ferroso heptahidratado	Sigma-Aldrich	F8263	Nocivo
Ácido fólico	Alfa Aesar	J62937
Glucosa	Sigma-Aldrich	G8270
Hemina	Sigma-Aldrich	H9039
Hepes	Alfa Aesar	A14777
Isobutirato	Alfa Aesar	L04038
Isovalato	Alfa Aesar	A18642
Cloruro de magnesio hexahidrato	Sigma-Aldrich	M8266
Tetrahidrato de cloruro de manganeso	Sigma-Aldrich	221279
Niacina (ácido nicotínico)	Sigma-Aldrich	N4126
Cloruro de níquel(II) hexahidrato	Alfa Aesar	A14366	Nocivo
N-valerato	Sigma-Aldrich	240370
Ácido P-aminobenzoico	MP China	102569	Tóxico, irritante
Ácido fosfórico	Sigma-Aldrich	P5811
Dihidrógeno fosfato de potasio	Sigma-Aldrich	P5504
Fosfato de hidrógeno potásico	Sigma-Aldrich	1551128
Piridoxina	Alfa Aesar	A12041
Resazurin	Sigma-Aldrich	R7017
Riboflavina	Alfa Aesar	A11764
Sosa	Sigma-Aldrich	1613757
Cloruro de sodio	Biorreactivos de Fisher	7647-14-5
Hidróxido sódico	Fisher Chemicals	S320
Molibdato sódico dihidratado	Acros orgánicos	206375000
Clorhidrato de tiamina	Acros orgánicos	148991000
Tripticasa	BD Biociencias	211921
Vitamina B12	Sigma-Aldrich	V2876
Extracto de levadura	Sigma-Aldrich	70161
Sulfato de zinc heptahidrato	Sigma-Aldrich	Z0251
Filtro de membrana de 0,22 μm
Cuentas magnéticas de purificación AMPure	Agencourt
Cámara anaeróbica con incubador	Sistema anaerobiano forma, Thermo Scientific, EE. UU.
Filtro de botella	Corning
Estameña
Medidor de pH
Vórtice	Termociencia