Cuantificación de la desprendimiento bacteriano para evaluar el potencial de transmisión de infecciones en Drosophila

Resumen

Fuente: Siva-Jothy, J. A., et al., Infección bacteriana oral y desprendimiento en Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo demuestra el procedimiento para monitorizar la desprendimiento bacteriano en Drosophila mediante la transferencia de una mosca infectada a través de múltiples tubos que contienen alimento, recuperando bacterias eliminadas y cuantificando colonias viables mediante dilución y placado en serie.

Protocolo

1. Medir la desprendimiento bacteriano
   1. Mide la caída junto con la carga interna.
   2. Tras la infección, transfiere moscas individuales a tubos microcentrífugas de 1,5 mL que contienen ~50 μL de medio Lewis durante 24 horas.
   3. Retira las moscas para la medición de la carga interna y lava los tubos con 100 μL de 1x PBS (solución salina tamponada con fosfato) vórtice intensamente durante 3 segundos.
   4. Mide las UFC (unidades formadoras de colonias) en este lavado mediante el placado sobre el lagar nutritivo LB (Luria-Bertani).
   5. Tras la infección, transfiere moscas individuales a tubos microcentrífugas de 1,5 mL ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Frascos	Sarstedt Ltd.	58.49	Tubo plano de poliestireno 75mm x 23,5mm, 23ml
Agar	Sigma-Aldrich	A7002	Agar, ceniza 2,0-4,5%
Azúcar moreno	Bidvest	66032	Azúcar moreno blanda clara
Maíz	La granja Dove's		Harina de maíz ecológica
Levadura fermipana	Bidvest	96360	Levadura seca e instantánea
Placas de Petri	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 placa de Petri 90 x 16,2 mm de ventilación triple estéril
Tubo Eppendorf (1,5 ml)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Tapa de empuje Cónica de Base Cónica de tubo Micro Sarstedt 1,5 ml Neutro Estándar
Etanol	VWR International Ltd.	20821.33	ETANOL ABSOLUTO ANALAR NP ACS/R.PE - Grado Analítico
Caldo LB, Miller	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Contiene 10g de triptona, 5g de extracto de levadura, 10g de cloruro de sodio por litro
Microplaca de 96 pozos	Suministros de Laboratorio Científico Ltd.	353072	Microplaca de cultivo celular de poliestireno tratada con TC y fondo bien transparente con tapa estéril
Vórtice	Fisherbrand		Mezclador de giro 75W 50-6-Hz 220-240V
Puntas de pipeta de 10 μL	Greiner Bio-one Inc	741015	Carga fácilmente al estilo Gilson. Graduado, limpio, recargado, 960 piezas
Puntas de pipeta de 200 μL	Greiner Bio-one Inc	741065	Carga fácilmente al estilo Gilson. Graduado, limpio, recargado, 960 piezas
Puntas de pipeta de 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	741045	Carga fácilmente al estilo Gilson. Graduado, limpio, recargado, 960 piezas
Puntas de pipeta filtradas de 20 μL	Greiner Bio-one Inc	774288	Punta de filtro al estilo Gilson. Transparente, rack azul, paquete individual, libre de R/Dnase, 10 racks de 96 piezas
Puntas de pipeta filtradas de 200 μL	Greiner Bio-one Inc	739288	Punta de filtro al estilo Gilson. Transparente, rack azul, paquete individual, libre de R/Dnase, 10 racks de 96 piezas
Puntas de pipeta filtradas de 1000 μL	Greiner Bio-one Inc	740288	Punta de filtro al estilo Gilson. Transparente, rack blue, paquete individual, libre de R/Dnase, 10 racks de 60 piezas