Patogénesis Bacteriana e Interacciones con el Huésped

Fuente: Jung, A. L., et al. Vesículas de membrana externa de Legionella pneumophila: aislamiento y análisis de su potencial proinflamatorio en macrófagos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra el aislamiento de vesículas de membrana externa (OMVs) de Legionella pneumophila mediante centrifugación secuencial, filtración estéril y ultracentrifugación. Los OMVs purificados, enriquecidos en proteínas de membrana y lipopolisacáridos, son adecuados para estudios de interacción huésped-patógeno.

Comienza con tubos que contienen la etapa persistente no replicante, o NRP, de Mycobacterium tuberculosis, que presenta una capa externa engrosada.Añade perlas de vidrio a un tubo y agita para alterar mecánicamente la capa externa de las micobacterias, aumentando la permeabilidad.Después, transfiere la suspensión micobacteriana batida por la perla a un tubo nuevo.Añade rifampicina marcada con fluorescente, un antibiótico antituberculoso, tanto a las suspensiones celulares sin tratar como a las...

Comienza con una suspensión de E. patógeno aviar. coli o APEC en medios de cultivo.APEC es una bacteria Gram negativa que infecta aves de corral al entrar por las vías respiratorias.Tras romper la capa mucosa, APEC se adhiere a las células epiteliales, se multiplica localmente y altera la barrera epitelial para entrar en el torrente sanguíneo. Las bacterias se propagaron a múltiples órganos, causando una infección sistémica.Añadir un volumen igual de la suspensión bacteriana a cada pozo de una...

Fuente: Spiesz, E. M., et al., Patrón tridimensional de biopelículas ingenierizadas con un bioimpresor bricolaje. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra un método para comparar patrones de alginato impresos en 3D que contienen cepas bacterianas de control o genéticamente modificadas. La cepa de prueba produce fibras de rizo al inducirlas, que refuerzan la estructura de hidrogel de alginato. Tras el tratamiento con una solución quelante de calcio, solo el patrón de prueba permanece intacto, lo...

Fuente: Tay, S. B., et al. Disrupción antivirulenta de biopelículas patógenas mediante lactonasas modificadas que apagan el quórum. J. Vis. Exp. (2016)El vídeo demuestra un método para cuantificar biomasa de biofilm en una bacteria patógena, comparando controles no tratados con muestras tratadas con una enzima que apaga el quorum. La enzima interrumpe la señalización bacteriana durante la incubación temprana, reduciendo la adhesión celular. Tras el lavado y una incubación adicional, los pozos...

Fuente: Schlafer, S, y Frost Kristensen, M. Monitorización del pH extracelular en biofilms inter-reino mediante microscopía confocal. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra el cultivo de biopelículas cruzadas de Streptococcus mutans y Candida albicans bajo condiciones similares a las orales para modelar las interacciones bacteriana-fúngica, permitiendo el estudio de la sinergia microbiana, la adhesión mediada por glucano y la virulencia acidogénica en la patogénesis oral.

Fuente: Kurz, D. L., et al. Plataforma microfluídica para estudiar el biobloqueo en medios porosos. J. Vis. Exp. (2022)El vídeo demuestra el uso de un dispositivo microfluídico para estudiar la formación de biopelículas. Se introduce una suspensión bacteriana en el microcanal, seguida de incubación para permitir el desarrollo de biofilm. Luego se reanuda el flujo y se utiliza la monitorización de la presión junto con la imagen para detectar la formación de biofilm y la obstrucción de los poros...

Fuente: Perinbam, K., y Siryaporn, A. Un ensayo rápido de virulencia bacteriana basado en imágenes usando ameba. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra un método rápido basado en imágenes para evaluar la virulencia bacteriana incubando amebas con bacterias adheridas a la superficie o planctónicas, aplicando una almohadilla de agarosa de calceína-acetoximetilo (calceína-AM) y obteniendo imágenes de fluorescencia para detectar daños en las células huésped.

Fuente: Bucher, T., et al. Metodologías para el estudio de biopelículas de B. subtilis como modelo para caracterizar inhibidores de biopelículas de moléculas pequeñas. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo muestra un ensayo de formación de películas utilizando Bacillus subtilis para evaluar inhibidores de moléculas pequeñas que interrumpen la síntesis de matrices y el desarrollo de biopelículas, proporcionando un modelo para detectar compuestos que inhiben selectivamente el crecimiento asociado a la...

Fuente: Bucher, T., et al. Metodologías para el estudio de biopelículas de B. subtilis como modelo para caracterizar inhibidores de biopelículas de moléculas pequeñas. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demuestra cómo la integridad de la matriz de biofilm influye en la resistencia bacteriana al etanol comparando unidades formadoras de colonias en biopelículas no tratadas y con inhibidores alterados. La reducción de las UFC en muestras tratadas con inhibidores demuestra que la matriz extracelular es...

Fuente: Beaudoin, T., et al. Visualización de los efectos del esputo en el desarrollo de biofilm utilizando un modelo de coverglass con cámara. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra el uso de un tapa con cámara para estudiar el efecto de los factores del esputo derivados de pacientes con fibrosis quística en el desarrollo de biofilm bacteriano.

Comienza con una suspensión bacteriana en medio nutritivo.Añade la suspensión a una placa de varios pozos e incuba.Los nutrientes del medio facilitan el crecimiento y la adhesión bacteriana.Las bacterias adheridas secretan sustancias poliméricas extracelulares compuestas por polisacáridos, proteínas y ADN para formar una capa de biofilm.Lava varias veces con buffer para eliminar bacterias que no se unen.Invierte la placa para asegurar la eliminación del líquido residual del pozo y deja que la...

Fuente: Hu, Y., et al. Análisis de las interacciones entre endobióticos y microbiota intestinal humana utilizando sistemas de fermentación in vitro en baños. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el uso de la cromatografía de capa delgada (TLC) para evaluar la degradación de exopolisacáridos (EPS) por la microbiota fecal humana. Los fragmentos de EPS en los sobrenacionantes de fermentación se separan según su tamaño y polaridad usando TLC, y luego se visualizan como bandas de colores tras una...

Fuente: Schumacher, D., y Sogaard-Andersen, L. Imagen de células vivas con fluorescencia del ciclo celular vegetativo completo de la bacteria social de crecimiento lento Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra el uso de imágenes de células vivas para rastrear los orígenes cromosómicos marcados con fluorescencia durante la división celular bacteriana. Captura la dinámica de segregación cromosómica utilizando microscopía de contraste de fase en time-lapse y fluorescencia.

Fuente: Tokunou, Y. et al., Detección electroquímica del efecto isótopico cinético del deuterio en el transporte extracelular de electrones en Shewanella oneidensis MR-1. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra el montaje y funcionamiento de un modelo de reactor electroquímico diseñado para simular la formación de biopelículas en superficies de electrodos. La estimulación electroquímica controlada promueve la adhesión microbiana, lo que conduce al desarrollo gradual de una biopelícula...

Fuente: Naji, A., et al. Estudio del estrés oxidativo causado por los estreptococos del grupo Mitis en Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el uso de SKN-1 marcado con proteína fluorescente verde en C. elegans para monitorizar el estrés oxidativo siguiendo la fluorescencia verde. Los gusanos expuestos a S. gordonii muestran una fuerte fluorescencia nuclear, lo que confirma el estrés inducido por patógenos, mientras que los alimentados con E. coli muestran...

Fuente: Nielsen, T. B., et al., Modelo de aspiración orofaríngea murina de neumonía bacteriana asociada a ventiladores y adquirida en hospital. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra el procedimiento de introducir bacterias a través de la orofaringe hasta los pulmones de un ratón anestesiado para inducir una infección pulmonar y desencadenar una respuesta inmune.

Fuente: Zhao, K., et al. Un modelo in vitro para estudiar el efecto de la terapia fotodinámica mediada por ácido 5-aminolevulínico sobre el biofilm de Staphylococcus aureus . J. Vis. Exp. (2018)El vídeo muestra un protocolo de terapia fotodinámica para evaluar los efectos antibacterianos en biopelículas bacterianas Gram-positivas. Las biopelículas se dividen en cuatro grupos: dos reciben un precursor fotosensibilizador y dos reciben un tampón. Todos son incubados en la oscuridad, seguidos de la...

Source: Escudero, J. A., et.al. Testing the Role of Multicopy Plasmids in the Evolution of Antibiotic Resistance. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates how escalating cefazidime exposure is used to compare the survival of three E. coli strains with different copies of the ampicillin resistance gene. It shows that only the strain with a multicopy plasmid survives at higher drug levels, highlighting how increased gene copy number accelerates resistance evolution.

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the phage-mediated transfer of donor DNA carrying an excisable antibiotic resistance cassette into Escherichia coli. The integrated cassette replaces the target gene via homologous recombination, resulting in a stable gene deletion.

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method for studying host-pathogen interactions using a micro-parallel plate flow chamber seeded with human primary endothelial cells. Following endothelial cell activation by an ionophore and perfusion with fluorescently labeled bacteria, the cells release von Willebrand factor (VWF), which binds bacterial adhesins under shear...

Source: Holt-Torres, P. S. et al. Evaluation of Antimicrobial Activities of Nanoparticles and Nanostructured Surfaces In Vitro. J. Vis. Exp. (2023)This video demonstrates the use of the focused-contact exposure method to evaluate the antibacterial activity of nanostructured surfaces. It outlines the steps involved in establishing direct contact between bacteria and the nanostructured surface, incubation, bacterial collection, and colony counting to assess viability.

Source: Dubois, V., et al. Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure of co-culturing amoebae with mutant bacterial strains to evaluate their intracellular survival and identify virulence markers through differences in colony counts.

Fuente: Nagre, N., et al. Fagocitosis de macrófagos alveolar y eliminación bacteriana en ratones. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra la evaluación de la fagocitosis mediada por receptores del complemento utilizando glóbulos rojos de oveja opsonizados con IgM y complemento, seguida de su captación por macrófagos de ratón. El grado de fagocitosis se cuantifica midiendo un producto cromogénico azul formado por la oxidación catalizada por hemoglobina del diaminofluoreno.

Fuente: Zhang, S., et al. Vía subaracnoide intracraneal de la infección para investigar los roles de los biofilms de Streptococcus suis en meningitis en un modelo de infección murina. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra la detección de la expresión génica objetivo en el cerebro de un ratón infectado por bacterias. Se extrae ARN, se trata con una enzima que degrada el ADN y se transcribe inversamente en ADNc. El ADNc se amplifica mediante ciclos térmicos con cebadores específicos de cada...

Fuente: Radulovic, K., et al. Inyecciones de lipopolisacáridos en ratones para simular la entrada de productos de origen microbiano tras la ruptura de la barrera intestinal. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra un procedimiento paso a paso para inyectar lipopolisacáridos (LPS) en ratones de forma intraperitoneal para inducir inflamación sistémica.

Tomemos cultivos de células de riñón de cerdo, con un cultivo pretratado con un inhibidor que aumenta el pH lisosomal, afectando la degradación autofágico-lisosomal.Añade bacterias patógenas y centrifuga para mejorar el contacto huésped-patógeno.Incubar para permitir la invasión bacteriana e internalización en las vesículas endocíticas.Las bacterias internalizadas consumen nutrientes del huésped para replicarse, lo que desencadena estrés metabólico.Este estrés activa la autofagia, donde una...

Toma un cultivo adherente de macrófagos murinos.Trata bien la prueba con un buffer que contiene Wnt5A, una molécula de señalización, y el control solo con buffer.Infecta con un patógeno bacteriano e incuba.En las células de prueba, Wnt5A activa una cascada de señalización que mejora la reorganización del citoesqueleto para potenciar la captación bacteriana en los fagosomas, mientras que las células de control que carecen de esta señalización internalizan menos bacterias.Lavar para eliminar...

Fuente: In, J. G., et al. Monagocapas colonoides humanas para estudiar las interacciones entre patógenos, comensales y el epitelio intestinal del huésped. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo muestra el procedimiento para cultivar células epiteliales derivadas del colon en un sistema Transwell recubierto de colágeno para generar una monocapa productora de moco que modela la barrera intestinal y permite estudios de interacción huésped-patógeno.

Fuente: Luukinen, H., et al. Modelado de la tuberculosis en peces cebra adultos infectados por Mycobacterium marinum . J. Vis. Exp. (2018).

Fuente: Sigal, N., et al. Purificación de ARN de Listeria monocytogenes cultivada intracelularmente en células macrófagas. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la extracción de ARN de Listeria monocytogenes aislada de macrófagos murinos infectados. El protocolo preserva el ARN, lisa las células usando fenol-cloroformo y calor, y separa el ARN mediante centrifugación. La sal y el etanol, combinados con la incubación en frío, promueven la precipitación de ARN. El ARN resultante captura la...

Fuente: Vonaesch, P. et. al., Análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras un desafío bacteriano en células de mamíferos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la infección de las células epiteliales con la bacteria patógena Shigella flexneri y la respuesta celular del huésped resultante. Las proteínas efectoras bacterianas interrumpen la traducción del huésped, desencadenando la formación de orgánulos sin membrana llamados gránulos de estrés, que reflejan la...

Empieza con un cultivo de células inmunitarias infectadas con bacterias patógenas que forman cuerpos de inclusión intracelular.La infección bacteriana afecta la vía de presentación de antígenos en las células inmunitarias.Toma un cultivo no infectado como control.Después, añade un antígeno proteico modelo e incuba.Las células inmunitarias internalizan, procesan y presentan los péptidos modelo derivados de antígenos en moléculas MHC-I.Tras la incubación, lava las células para eliminar cualquier...

Fuente: Chetrit, D., et al. Aplicación de imágenes de células vivas y tomografía crioelectrónica para resolver características espaciotemporales del sistema de secreción punto/ icm de Legionella pneumophila . J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demuestra la preparación e imagen de bacterias patógenas marcadas con fluorescencia. Las almohadillas de agarosa se preparan y colocan primero dentro de un marco adhesivo. Se aplica una suspensión de bacterias genéticamente modificadas que expresan una...

Fuente: Winston, J. A., et al. Modelo murino tratado con cefoperazona de la cepa clínicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo muestra el procedimiento para inocular ratones pretratados con antibióticos con esporas de Clostridium difficile para establecer un modelo murino de infección que estudie la patogénesis y las respuestas del huésped.

Fuente: Winston, J. A. et al. Modelo murino tratado con cefoperazona de la cepa clínicamente relevante de Clostridium difficile R20291. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la cuantificación de Clostridium difficile en muestras fecales de un modelo murino infectado utilizando técnicas de cultivo selectivo. Describe los procedimientos para la recogida de muestras, el procesamiento anaeróbico, la dilución en serie y la enumeración de colonias para evaluar la colonización bacteriana y las...

Source: Berens, C. et al. Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the use of immunoblotting to assess apoptosis inhibition by the bacterial effector protein CaeB in human cells. It outlines the steps for detecting apoptotic markers following doxycycline-induced expression of pro-apoptotic proteins in host cells expressing the effector.

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Source: Li, T., et al. Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates how cigarette smoke extract weakens antimicrobial defense in lung epithelial cells by reducing AMP production, leading to increased bacterial invasion. The procedure measures intracellular bacterial load to assess the impact of smoke exposure on host-pathogen interactions.

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

Source: Barbero, A. M., et al. Fluorescence Assays for the Study of Mycobacterium tuberculosis Interaction with the Immune Receptor SLAMF1. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates the procedure for labeling host immune receptors that bind bacterial surface antigens, enabling their detection through flow cytometry.

Source: Zhang, C. et al. Development and Assessment of Intracellular Infection Models for Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates the quantification of intracellular survival of a methicillin-resistant bacterial pathogen in mouse peritoneal macrophages. It outlines the steps involved in infection, extracellular bacterial clearance, host cell lysis, and colony enumeration to assess bacterial survival within host macrophages.

Source: Gutiérrez, S., et al., Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the magnetic isolation of phagosomes containing biotin–streptavidin bead–coated bacteria from infected macrophages. The protocol includes buffer treatments, cell disruption, magnetic separation, and washing to yield purified phagosomes for analysis.

Fuente: Mills, B., et al., Cribado óptico de sondas bacterianas nuevas en tejido pulmonar humano ex vivo mediante endomicroscopía láser confocal. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra imágenes en tiempo real de Staphylococcus aureus marcado con fluorescencia en suspensión y tejido pulmonar utilizando microscopía de fluorescencia confocal fibrada.

Fuente: Ng, K. M., Tropini, C. Visualización de las interacciones microbiota-huésped intestinal mediante hibridación in situ por fluorescencia, tinción de lectinas e imagen. J. Vis. Exp. (2021).Este vídeo demuestra el procedimiento de hibridación fluorescente in situ (FISH) para teñir la microbiota intestinal dentro del tejido intestinal del ratón mediante la hibridación de sondas fluorescentes con ARNr bacteriano (ácido ribonucleico ribosómico) y la contracoloración de las estructuras del...

Fuente: Siva-Jothy, J. A., et al., Infección bacteriana oral y desprendimiento en Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra el procedimiento para monitorizar la desprendimiento bacteriano en Drosophila mediante la transferencia de una mosca infectada a través de múltiples tubos que contienen alimento, recuperando bacterias eliminadas y cuantificando colonias viables mediante dilución y placado en serie.

Fuente: de Vries, C. R., et al., Un modelo de inoculación retardada de infección crónica de heridas por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demuestra una técnica de imagen bioluminiscente para monitorizar la progresión de la infección bacteriana en un modelo murino vivo. Las bacterias patógenas diseñadas con el sistema reportero luxABCDE emiten luz en el lugar de la infección, permitiendo la visualización de bacterias metabólicamente activas. Al imaginar el ratón a lo largo...

Fuente: Shi, J., et al. Cribado e identificación de supresores silenciadores de ARN a partir de efectores secretados de patógenos vegetales. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra un ensayo de coinfiltración para identificar proteínas efectoras de patógenos que suprimen el silenciamiento de ARN en Nicotiana benthamiana 16c. Un reportero fluorescente y un gen efector candidato se introducen en las hojas de las plantas a través de Agrobacterium. Normalmente, el silenciamiento de ARN degrada los...

Fuente: Niu, L., et al. Visualización de la muerte celular lítica de macrófagos durante la infección por micobacterias en embriones de pez cebra mediante microscopía intravital. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el uso de microscopía confocal intravital para visualizar la muerte lítica de los macrófagos en embriones de pez cebra tras una infección por Mycobacterium marinum .

Fuente: Seman, B. G., et.al. Modelo de imagen neonatal de sepsis bacteriana Gramnegativa. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra el aislamiento de neutrófilos y monocitos inflamatorios de bazos neonatales de ratón y su aplicación en un ensayo luminiscente de eliminación bacteriana. Cubre la disociación mecánica, la lisis de glóbulos rojos, el enriquecimiento celular basado en perlas magnéticas, la incubación bacteriana y la protección con antibióticos. Las lecturas de luminiscencia...

Fuente: Choi, Y. S., et al. Detección in situ de bacterias en tejidos incrustados en parafina mediante una sonda de ADN marcada con digoxina que apunta al ARNr 16S. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demuestra la detección in situ de bacterias en secciones de tejido gingival de ratón utilizando sondas de ADN marcadas con digoxinas que atacan el ADN bacteriano. La sección se incuba con la sonda. Se añaden anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina específicos a la digoxina. Se inactivan...

Fuente: Valentine, M. E., et al., Generación de mutantes de deleción génica en cuadro en Pseudomonas aeruginosa y pruebas de atenuación de virulencia en un modelo simple de infección en ratón. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra el uso de un enfoque de imagen basado en bioluminiscencia para monitorizar la infección bacteriana en un modelo de ratón vivo. La imagen secuencial bioluminiscente y de rayos X permite la visualización en tiempo real y la localización anatómica de la infección...

Fuente: Luyts, N., et al. Seguimiento longitudinal de infecciones urinarias y su tratamiento en ratones mediante imagen bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2021).Este vídeo muestra la inducción y seguimiento de la infección urinaria en un modelo murino utilizando E. coli bioluminiscente inyectada en la vejiga, donde ocurren adhesiones, invasión y replicación intracelular bacteriana. La luz emitida por el operón bioluminiscente sirve como marcador en tiempo real de la carga bacteriana durante la...

Fuente: O'Brien, V. P., et. al., Infección urinaria recurrente de Escherichia coli desencadenada por exposición a la vejiga a Gardnerella vaginalis en ratones. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra el uso de microscopía electrónica de barrido para visualizar la colonización bacteriana y las interacciones huésped-patógeno en el epitelio de vejiga de un modelo murino preinfectado.

Fuente: Bernut, A., et al., Descifrando e Imaginando la patogénesis y el cordón de Mycobacterium abscessus en embriones de pez cebra. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demuestra un protocolo para aislar y cuantificar Mycobacterium abscessus de un embrión infectado de pez cebra. El procedimiento implica la eutanasia embrionaria, la lisis tisular y la homogeneización para liberar las bacterias, seguidas de centrifugación y resuspensión en un tampón de tensioactivo. Finalmente, la suspensión...

Fuente: Bernut, A., et al. Desciframiento e imagen de la patogénesis y cordón de Mycobacterium abscessus en embriones de pez cebra. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demuestra un protocolo que utiliza embriones transgénicos de pez cebra que expresan macrófagos fluorescentes e infectados con la cepa rugosa fluorescente de Mycobacterium abscessus para visualizar las interacciones huésped-patógeno. Revela cómo el cordón extracelular permite la evasión inmunitaria, promoviendo la supervivencia...

Comienza con una muestra de agua contaminada que probablemente contenga coliformes fecales, incluyendo E. coli.Realizar una dilución en serie en agua destilada para reducir la turbidez y la carga microbiana.Mezcla la muestra diluida deseada con el medio nutritivo y cárgala en un chip microfluídico.Utiliza filtración al vacío para capturar bacterias en una membrana dentro del canal serpentino del chip.Añade medio nutritivo a la cámara superior e incuba para mejorar la recuperación...

Fuente: Makowski, Ł., et al. Imagen de células vivas del ciclo de vida del depredador bacteriano Bdellovibrio bacteriovorus mediante microscopía de fluorescencia en lapso de tiempo. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra imágenes de fluorescencia en lapso de tiempo de Bdellovibrio bacteriovorus que se alimentan de E. coli inmovilizada bajo una almohadilla de agarosa, permitiendo la visualización en tiempo real de la replicación intracelular y la liberación de descendencia para estudiar la...

Fuente: Tay, S. B., et.al. Disrupción antivirulenta de biopelículas patógenas mediante lactonasas modificadas que apagan el quórum. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra el proceso de inhibir la formación de biopelículas introduciendo una enzima que interrumpe la señalización celular bacteriana. La enzima impide que las bacterias produzcan sustancias poliméricas extracelulares, reduciendo así el desarrollo de biofilm en una microplaca con fondo de cristal. Finalmente, la estructura de la...

Fuente: Collins, A. J., et al., Estableciendo cultivos binarios estables de sacaribacterias simbióticas a partir de la cavidad oral. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demuestra el uso de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar las Saccharibacterias en un cultivo binario con Actinomyces. El protocolo describe la amplificación del ADN y la electroforesis en gel para confirmar una interacción estable entre huésped y parásito.

Fuente: Matthysse, A. G. Adherencia de bacterias a superficies vegetales medida en laboratorio. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra la evaluación de la unión bacteriana a las raíces de las plantas mediante microscopía de contraste de fase. Las muestras de raíces de plántulas incubadas con bacterias se montan primero para comprobar la existencia de bacterias libres. Las muestras se lavan para eliminar bacterias sueltas y se vuelven a montar usando una cubierta adecuada para evitar daños.

Fuente: Matthysse, A. G. Adherencia de bacterias a superficies vegetales medida en laboratorio. J. Vis. Exp., (2018)Este vídeo demuestra un protocolo para medir la colonización radicular de plántulas de tomate por bacterias patógenas silvestres y deficientes en celulosa. Los recuentos viables de bacterias que se adhieren estrechamente muestran una mayor adhesión y formación de microcolonias por parte de la cepa silvestre, lo que pone de manifiesto el papel de la celulosa en la colonización...

Fuente: Brown, A. O., y Orihuela, C. J. Visualización de Streptococcus pneumoniae en Microlesiones Cardíacas y Remodelación Cardíaca Posterior. J. Vis. Exp. (2015)El vídeo demuestra la inmunotinción de secciones químicas fijadas de tejido cardíaco de ratón para visualizar bacterias patógenas localizadas dentro de microlesiones inducidas por infecciones. El proceso incluye lavado de tejidos, permeabilización de membrana, bloqueo de sitios inespecíficos, marcado de anticuerpos, contratinción...

Fuente: Specker, J. T., et al. Investigación de la cooperación microbiana mediante análisis por espectrometría de masas por imagen de colonias bacterianas crecidas en agar y en tejido durante la infección. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra el uso de espectrometría de masas asistida por desorción/ionización láser asistida por matriz (MALDI) para visualizar la distribución de aminoácidos en tejidos intestinales de ratones infectados con Clostridioides difficile, sola o en combinación con...

Fuente: Bucher, T., et al., Metodologías para estudiar biopelículas de B. subtilis como modelo para caracterizar inhibidores de biopelículas de moléculas pequeñas. J. Vis. Exp.(2016)Este vídeo demuestra la preparación de colonias bacterianas maduras de biofilm para imágenes de alta resolución. Cubre los pasos de fijación, deshidratación, montaje y recubrimiento metálico para preservar y visualizar la morfología de la biopelícula.

Fuente: Beaudoin, T., et al. Visualización de los efectos del esputo en el desarrollo de biofilm utilizando un modelo de coverglass con cámara. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra un método in vitro para evaluar cómo la fibrosis quística derivada del paciente influye en la formación de biofilm bacteriano. Utilizando portaobjetos de cámara, tinción fluorescente y microscopía confocal, revela un mayor grosor, arquitectura alterada y una mayor biomasa viable en biofilms cultivados con esputo,...

Tomemos tubos con un medio que contiene un compuesto de nanopartículas, diseñado a partir de una combinación de metales de transición y carbono.Introducir bacterias patógenas Gram-positivas y Gramnegativas resistentes a los antibióticos en tubos separados como muestras de prueba.Incluye bacterias no tratadas como control negativo y bacterias tratadas con antibióticos como control positivo.Incuba las muestras agitándolas.En bacterias Gramnegativas, la membrana externa porosa y la fina capa de...

Fuente: Bratton, B. P., et al., Imagen tridimensional de células bacterianas para representaciones celulares precisas y localización precisa de proteínas. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el método para adquirir y analizar imágenes de fluorescencia tridimensionales de células bacterianas para estudiar la organización de proteínas a nivel de célula única.

Fuente: Le, T. A. N. , et al., Medición de los efectos de bacterias y químicos sobre la permeabilidad intestinal de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra un ensayo basado en fluorescencia para cuantificar la permeabilidad intestinal en C. elegans expuesto a Pseudomonas aeruginosa. En comparación con los controles alimentados con Escherichia coli, los gusanos tratados con patógenos muestran una mayor fuga de fluoróforos hacia la cavidad corporal, lo que indica daño en...

Fuente: O'Brien, V.P. et al. Infección urinaria recurrente por Escherichia coli desencadenada por la exposición a la vejiga de Gardnerella vaginalis en ratones. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra la preparación de un inóculo de Gardnerella vaginalis para establecer un modelo murino de infección urinaria recurrente.

Fuente: Lenhard, A. et al. Un modelo murino para la transición de Streptococcus pneumoniae de colonizador a patógeno tras la coinfección viral recapitula la enfermedad agravada por la edad. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo muestra un modelo de coinfección en ratones en el que el virus de la gripe desencadena la transición de Streptococcus pneumoniae de colonizador a patógeno. Detalla los pasos implicados en la colonización bacteriana, la infección viral y la progresión de la enfermedad.

Fuente: Lenhard, A., et al. Un modelo murino para la transición de Streptococcus pneumoniae de colonizador a patógeno tras la coinfección viral recapitula la enfermedad agravada por la edad. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo muestra el procesamiento de los pulmones de un ratón coinfectado con una bacteria patógena y un virus. La trituración, homogeneización y placado del tejido pulmonar permiten cuantificar la carga bacteriana, lo que indica la propagación bacteriana a los pulmones y la gravedad de...

Fuente: Cross, T., et al., Técnica de enriquecimiento optimizada para el aislamiento de especies de bacteriófagos de artrobacter a partir de muestras de suelo. J. Vis. Exp.(2015)Este vídeo muestra la preparación de un cultivo bacteriano para la producción de bacteriófagos. Cubre los pasos de inoculación de una bacteria del suelo en un matraz con concierto, promoviendo un crecimiento uniforme mediante aireación y agitación, y monitorizando la densidad celular mediante mediciones ópticas de...

Fuente: Conover, M. S. et al., Establecimiento y caracterización de ITU y CAUTI en un modelo murinho. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demuestra la detección de comunidades bacterianas intracelulares (IBCs) en tejido de vejiga de ratón infectado con Escherichia coli que expresa β-galactosidasa. Tras la fijación tisular, permeabilización y tinción con X-gal, los IBC aparecen como puntos azules bajo un microscopio disecante, confirmando la invasión bacteriana durante la infección urinaria.

Fuente: Wang, Y., et al. In Vivo Investigación de la terapia antimicrobiana de luz azul para infecciones por quemaduras multirresistentes a Acinetobacter baumannii mediante imágenes de bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra cómo establecer una infección por quemaduras en un modelo murino aplicando un bloque de latón calentado seguido de un inoculo bacteriano patógeno. Las bacterias colonizan la matriz extracelular expuesta y forman un biofilm, lo que permite estudios in vivo...

Fuente: Wang, Y., et al. In Vivo Investigación de la terapia antimicrobiana de luz azul para infecciones por quemaduras multirresistentes a Acinetobacter baumannii mediante imágenes de bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo muestra el procedimiento para obtener imágenes de infecciones de quemaduras en ratones inoculados con Acinetobacter baumannii que portan un operón bioluminiscente. Demuestra cómo la oxidación del sustrato catalizada por luciferasa produce luz proporcional a la carga...

Fuente: Barbero, A. M., et.al. Ensayos de fluorescencia para el estudio de la interacción de Mycobacterium tuberculosis con el receptor inmunitario SLAMF1. J. Vis. Exp. ( (2025)Este vídeo muestra un ensayo basado en fluorescencia para estudiar la interacción entre un receptor de macrófagos y antígenos de Mycobacterium tuberculosis . Los antígenos marcados con fluorescencia en un abrigo se incuban con extractos de proteínas de macrófagos, se reticulan, se marcan con anticuerpos y se visualizan...

Fuente: Li, J., et al. Desarrollo de un modelo larvario de infección por peces cebra para Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo muestra el procedimiento de microgavage, en el que una larva de pez cebra anestesiada es inmovilizada en agarosa e inyectada oralmente con una bacteria patógena usando una aguja guiada por trazadores. El parto no invasivo imita la infección natural, permitiendo analizar la replicación bacteriana, la liberación de toxinas y el daño epitelial...

Fuente: Rufián, J. S., et.al. Análisis unicelular de la expresión de genes de Pseudomonas syringae en el tejido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra un método de infiltración por vacío para introducir un patógeno bacteriano en las hojas de las plantas de Arabidopsis . El enfoque utiliza una suspensión bacteriana preparada y pulsos de vacío para permitir una entrada uniforme a través de estomas, lo que resulta en una infección controlada de las hojas.

Fuente: Casanova, A., et al. Ensayos basados en microscopía para el cribado de alto rendimiento de factores del huésped implicados en la infección por Brucella en células Hela. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra imágenes de alto rendimiento de la infección por Brucella abortus en células epiteliales con knockdown STING mediado por SIRNA para investigar el papel de la detección del ADN citosólico en la replicación intracelular bacteriana y la respuesta inmunitaria innata del huésped.

Fuente: Miquel Guennoc, C., et al. Nuevo método para el análisis cualitativo multiescala de biopelículas bacterianas en colonias fúngicas filamentosas utilizando microscopía confocal y electrónica. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la preparación de un cultivo fúngico en membranas de celofán tratadas para apoyar la formación de colonias y el crecimiento radial. Luego muestra el cultivo y la preparación de células bacterianas del suelo para ensayos de interacción. Finalmente, ilustra cómo...

Fuente: Harris, S. L., et al. Monitorización de la colonización bacteriana y el mantenimiento en raíces de Arabidopsis thaliana en un sistema hidropónico flotante. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra un protocolo para monitorizar la colonización de bacterias asociadas a raíces en plántulas de Arabidopsis thaliana cultivadas en un sistema sin suelo. Tras la colonización, las bacterias son desplazadas por sonicación, luego diluidas, placadas e incubadas para formar colonias que reflejan la...

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Source: Jackson, L., et al. Visualization of Pseudomonas aeruginosa within the Sputum of Cystic Fibrosis Patients. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in situ visualization of Pseudomonas aeruginosa within chemically cleared cystic fibrosis sputum using fluorescent labeling and confocal microscopy to reveal bacterial localization and biofilm structure.

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Source: Liu, X., et al. Bacterial Leaf Infiltration Assay for Fine Characterization of Plant Defense Responses using the Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae Pathosystem. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates a method to assess the bacterial load in Arabidopsis thaliana leaves infected with Pseudomonas syringae. Leaf discs from infected leaves are homogenized, serially diluted, and plated onto nutrient-rich agar to promote bacterial colony formation. Colony counts are then used to...

Source: Ahn, J. J., et al. Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)The video demonstrates bacterial load measurement in spleen and liver tissues isolated from mice infected with an intracellular bacterial pathogen. Bacteria, accumulated within tissue-resident phagocytes during systemic infection, are released using detergent-based lysis and mechanical disruption. Serial dilutions of the homogenates are plated on...

Fuente: Siva-Jothy, J. A., et al. Infección bacteriana oral y desprendimiento en Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)El vídeo muestra la infección oral de Drosophila melanogaster con bacterias patógenas. Incluye la preparación de viales de infección y la transferencia de moscas hambrientas para facilitar la ingestión bacteriana. El procedimiento captura la colonización intestinal, seguida de la esterilización superficial y la homogeneización de las moscas. Finalmente, muestra la...

Fuente: Mueller, A., et al. Un modelo experimental para estudiar la coinfección tuberculosis-malaria tras la transmisión natural de Mycobacterium tuberculosis y Plasmodium berghei. J. Vis. Exp. (2014)Este vídeo muestra la administración en aerosoles de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) a ratones utilizando un sistema de cámaras basado en nebulizador para inducir infecciones pulmonares, proporcionando un modelo controlado y reproducible para estudiar la transmisión aérea de la tuberculosis y las...

Fuente: de Vries, C. R., et.al. Un modelo de inoculación retardada de la infección crónica de la herida por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra la inoculación tardía de Pseudomonas aeruginosa luminiscente en un ratón con dos heridas dorsales cutáneas de grosor completo cubiertas por un apósito transparente. Esto facilita la formación de biofilm y el establecimiento de infecciones crónicas. El monitoreo regular de bioluminiscencia permite cuantificar la carga...

Fuente: Liu, X., et al. Un ensayo de alimentación oral bacteriana con mosquitos tratados con antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demuestra el agotamiento de la microbiota intestinal nativa en los mosquitos utilizando una solución que contiene sacarosa. A esto le sigue una recolonización controlada con una suspensión bacteriana administrada a través de un sistema de alimentación por membrana para establecer una población bacteriana definida en el intestino del mosquito.

Fuente: Seman, B. G., et al. Un modelo de imagen neonatal de sepsis bacteriana gramnegativa. J. Vis. Exp. (2020)El vídeo muestra un modelo neonatal murino para estudiar la infección sistémica utilizando bacterias bioluminiscentes encapsuladas. A los cachorros neonatales se les inyectan suspensiones bacterianas de dosis altas o bajas y se les devuelven a su madre para cuidados postnatales. Las bacterias encapsuladas evaden la detección inmunitaria temprana, se propagan sistémicamente y se...

Fuente: Shi, J., et al., Cribado e identificación de supresores silenciadores de ARN a partir de efectores secretados de patógenos vegetales. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra el procedimiento para preparar un cultivo de Agrobacterium tumefaciens induciendo la expresión génica de virulencia con acetosiringona, seguida de la eliminación de antibióticos mediante lavado y resuspensión, para generar una suspensión lista para la transformación que permita la entrega génica en los tejidos...

Fuente: Behera, R.K. et al., Un método basado en fluorescencia para estudiar la regulación génica bacteriana en tejidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra la preparación de cultivos hemolíticos de Staphylococcus aureus para estandarizar el crecimiento bacteriano y lograr la sincronización metabólica para estudios de interacción huésped-patógeno.

Fuente: Shi, J., et al., Cribado e identificación de supresores silenciadores de ARN a partir de efectores secretados de patógenos vegetales. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra el procedimiento para preparar un cultivo de Agrobacterium tumefaciens induciendo la expresión génica de virulencia con acetosiringona, seguida de la eliminación de antibióticos mediante lavado y resuspensión, para generar una suspensión lista para la transformación que permita la entrega génica en los tejidos...

Fuente: Chen, Y., et al. Evaluación de la virulencia y patogénesis de la infección por Aeromonas en un modelo de Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra un ensayo de supervivencia utilizando C. elegans para modelar la patogénesis de Aeromonas , donde la ingestión oral de la bacteria provoca infección intestinal y mortalidad, permitiendo una evaluación cuantitativa de la virulencia bacteriana en un sistema huésped vivo.

Comienza con ratones inmunodeficientes portadores de tumores de xenoinjerto subcutáneo derivados de células cancerosas colorrectales humanas.Administra por vía oral Pediococcus pentosaceus, una bacteria láctica segura para el consumo y diseñada para secretar una proteína anticancerígena, al ratón tratado.Administra solución salina al ratón de control.Al ser tolerantes al ácido, las bacterias sobreviven al ambiente ácido del estómago y llegan al intestino.Allí, colonizan la luz intestinal y...

Comienza con ratones que tienen tumores sólidos implantados de forma subcutánea en el muslo.Inyecta a los ratones a través de la vena caudal con una cepa no virulenta y modificada de Salmonella typhimurium.Las bacterias circulan por el torrente sanguíneo y se acumulan selectivamente en el microambiente tumoral hipóxico e inmunosuprimido.Portan un plásmido que codifica un péptido terapéutico de fusión compuesto por un péptido penetrante en células y el dominio blanco mitocondrial de una proteína...

Fuente: Chen, Y., et al. Evaluación de la virulencia y patogénesis de la infección por Aeromonas en un modelo de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo muestra el ensayo de toxicidad líquida de C. elegans con Aeromonas, un método utilizado para evaluar la virulencia bacteriana midiendo la supervivencia de gusanos en un entorno líquido con pocos nutrientes. El ensayo revela patogenicidad específica de la cepa basada en la extensión del daño y mortalidad inducidos por toxinas en C.

Fuente: Nag, D., et al. Cuantificación de la colonización y diarrea por Vibrio cholerae en el modelo de pez cebra adulto. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra un protocolo para cuantificar la carga bacteriana intestinal en peces cebra adultos infectados con una cepa resistente a antibióticos de Vibrio cholerae. Tras la eutanasia y disección, el tracto intestinal se aísla, homogeneiza con perlas de vidrio y se procesa para liberar las bacterias. El homogenado resultante se coloca en un medio...

Fuente: Nag, D., et.al. Cuantificación de la colonización y diarrea por Vibrio cholerae en el modelo de pez cebra adulto. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra la inoculación de peces cebra adultos con una cepa patógena de Vibrio cholerae para estudiar la colonización intestinal y los resultados de enfermedades. Muestra cómo las toxinas bacterianas alteran la integridad intestinal, provocando fugas de líquido, secreción de moco y diarrea acuosa antes de que los peces estén preparados para un...

Fuente: Patras, K. A., Doran, K. S. Un modelo murino de colonización vaginal de Streptococcus del grupo B. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo muestra la preparación e inoculación vaginal de una ratona hembra tratada con hormonas y con estreptococo del grupo B para modelar la infección. Explica cómo cultivar y preparar las bacterias, administrar el inóculo en la luz vaginal y asegurar una infección exitosa.

Fuente: Patras, K. A. & Doran, K. S. Un modelo murino de colonización vaginal de Streptococcus del grupo B. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la cuantificación de la carga vaginal de Streptococcus del Grupo B (GBS) en un modelo murino mediante muestras y cultivo cromogénico. Describe los pasos implicados en la recogida de muestras, el placado y el conteo de colonias para cuantificar la carga de GBS en la luz vaginal del ratón.

Fuente: Conover, M. S., et al., J. Establecimiento y caracterización de ITU y CAUTI en un modelo murinho. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo muestra el procedimiento para ensamblar e implantar un catéter transuretral en una ratona, seguido de la inoculación bacteriana para establecer la infección urinaria asociada al catéter e investigar las interacciones hospedador-patógeno mediadas por biofilm.

Fuente: Flores, E., et al. Utilizando el protozoo Paramecium caudatum como vehículo para infecciones alimentarias en larvas de pez cebra. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra el método para establecer un modelo de infección intestinal bacteriana transmitida por alimentos en larvas de pez cebra, alimentándolas con paramecia infectada con E. coli fluorescente.

Fuente: Wang, Y., et al. Investigación in vivo de la terapia antimicrobiana de luz azul para infecciones por quemaduras de Acinetobacter baumannii multirresistentes mediante imágenes de bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo muestra el procedimiento para tratar infecciones de quemaduras causadas por bacterias bioluminiscentes y resistentes a medicamentos en ratones mediante terapia de luz azul, seguido de imágenes bioluminiscentes para monitorizar la eficacia del tratamiento.

Fuente: Ditkowski, B., et al. Un modelo in vitro de un sistema de perfusión de placas paralelas para estudiar la adherencia bacteriana a tejidos de injerto. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra el método de utilizar una cámara de flujo de placas paralelas para perfundir bacterias marcadas con fluorescencia sobre tejidos de injertos vasculares, permitiendo un análisis controlado de la adhesión bacteriana y la patogénesis temprana bajo condiciones de flujo cortante.

Fuente: Beernink, B. M. et al. Agroinoculación directa de plántulas de maíz mediante inyección con clones infecciosos del virus recombinante del mosaico de la cola de zorro y del virus del mosaico de la caña de azúcar. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demuestra la administración mediada por Agrobacterium de clones virales recombinantes en plántulas de maíz para el silenciamiento génico. Describe el proceso de infección por Agrobacterium , la propagación sistémica del virus y los cambios...

Fuente: Gupta, K., et al. Inyección intrarrenal de Escherichia coli en un modelo de ratón de pielonefritis. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo muestra la inyección intrarrenal de E. coli en la pelvis renal de una rata anestesiada para inducir una infección renal localizada, modelando la pielonefritis aguda. Destaca los pasos quirúrgicos clave y las técnicas asépticas necesarias para establecer un modelo de infección in vivo reproducible para análisis posteriores.

Fuente: Behera, R. K., et al. Un método basado en fluorescencia para estudiar la regulación génica bacteriana en tejidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo muestra un método para preparar tejido renal infectado de ratón, teñir ADN y detectar la expresión génica bacteriana utilizando dos reporteros fluorescentes. El rojo marca todas las bacterias y el verde resalta las células sensibles a la infección.

Fuente: Brzozowski, R. S. et al. Microscopía de fluorescencia de células vivas para investigar la localización de proteínas subcelulares y los cambios en la morfología celular en bacterias. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra la microscopía de fluorescencia de células vivas para visualizar cambios morfológicos en tiempo real en bacterias. Describe los pasos implicados en la obtención de imágenes, la adquisición en lapso de tiempo y la deconvolución para obtener imágenes de alta resolución...

Fuente: McMullen, P. D., Freitag, N. E. Evaluación de la invasión bacteriana de células cardíacas en cultivo y colonización cardíaca en ratones infectados usando Listeria monocytogenes. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo muestra la inyección de Listeria monocytogenes en la vena caudal de un ratón para establecer una infección sistémica. Muestra la circulación bacteriana, la colonización de órganos y la cuantificación de la carga bacteriana en el corazón mediante la homogeneización del tejido, la...

Fuente: Zhan, Y., et al. El fotoblanqueo permite la obtención de imágenes de superresolución del anillo FtsZ en el cianobacterio Prochlorococcus. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra el procedimiento para el fotoblanqueo de pigmentos en células cianobacterianas utilizando luz de xenón en condiciones de frío para mejorar la imagen de fluorescencia de proteínas reguladoras del crecimiento.

Fuente: Zhang, M. et al., Pruebas rápidas de susceptibilidad antimicrobiana mediante imágenes de dispersión Raman estimulada de incorporación de deuterio en una sola bacteria. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra la aplicación de la microscopía de dispersión Raman estimulada para evaluar la susceptibilidad a los antibióticos mediante el seguimiento de la actividad metabólica marcada con deuterio. Al monitorizar señales de carbono-deuterio, el método permite la detección rápida de poblaciones...

Fuente: Hiroyasu, A., D et al., Extracción de hemocitos de larvas de Drosophila melanogaster para infección microbiana y análisis. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra el procedimiento para establecer una infección bacteriana en larvas de Drosophila colocándolas en una gota bacteriana y pinchándolas con una aguja de tungsteno. Las larvas se incuban luego en una placa de agar ranurada y rica en nutrientes para estudiar las interacciones huésped-patógeno.

Fuente: Hiroyasu, A., et al. Extracción de hemocitos de larvas de Drosophila melanogaster para infección microbiana y análisis. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra imágenes confocales de alta resolución de hemocitos de Drosophila melanogaster infectados con Coxiella burnetii para visualizar la localización de patógenos en 3D, permitiendo un análisis detallado de la dinámica de la infección intracelular y las interacciones huésped-patógeno.

Fuente: Rufián, J. S., et al. Análisis unicelular de la expresión de genes de Pseudomonas syringae en el tejido vegetal. J. Vis. Exp. (2022).Este vídeo demuestra un método para analizar la expresión génica en bacterias patógenas extraídas de plantas a nivel unicelular utilizando un factor de transcripción marcado con fluorescencia. La imagen confocal revela heterogeneidad en la expresión génica de virulencia, destacando la diversidad funcional dentro de una población bacteriana clonal.

Source: Montefusco-Pereira, C. V. et al. P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives. J. Vis. Exp.(2020)This video demonstrates a co-culture model of bronchial epithelial cells and macrophage-like cells at the air-liquid interface to study host-pathogen interactions. Pathogenic bacterial infection compromises epithelial membrane integrity, triggering macrophage-like cell activation and...

Source: Nguyen, J. Q., et. al. Intratracheal Inoculation of Fischer 344 Rats with Francisella tularensis. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the procedure of intratracheal inoculation in an anesthetized rat, involving catheter placement, bacterial delivery into the trachea, and subsequent lung infection establishment for studying host-pathogen interactions.

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates an in vivo method for analyzing shear-dependent bacterial adhesion in a live mouse model. Following surgical preparation and catheterization, the mesenteric vasculature is exposed for real-time imaging under a fluorescence microscope. Perfusion with an ionophore and fluorescently labeled bacteria reveals how shear stress triggers...

Source: Poore, K., et al. Epithelial Cell Infection Analyses with Shigella. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates an in vitro assay to assess Shigella invasion and intracellular replication in human colonic epithelial monolayers. It highlights steps for infection, antibiotic selection, host cell lysis, and recovery of intracellular bacteria for downstream analysis.

Source: Zhang, C., et al., Development and Assessment of Intracellular Infection Models for Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2025)The video demonstrates the isolation of kidneys containing Staphylococcus aureus-infected macrophages, followed by tissue homogenization to release intracellular bacteria. It quantifies bacterial persistence within macrophages in control and antibiotic-treated groups by counting colony-forming units.

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Fuente: Morgan, E., et al. Limpieza selectiva de nematodos silvestres Caenorhabditis para enriquecer bacterias del microbioma intestinal. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demuestra un protocolo para aislar bacterias intestinales de interés de gusanos silvestres de Caenorhabditis . Primero se muere de hambre y lava a los gusanos para eliminar bacterias residuales de su superficie e intestino, preservando al mismo tiempo los microbios objetivo. Tras la limpieza superficial y varios pasos de...

Fuente: Petersen, C. et al., Aislamiento y caracterización de la microbiota natural del nematodo modelo Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra el aislamiento y cultivo de especies bacterianas asociadas a Caenorhabditis elegans. Una lisis basada en perlas de C. elegans, seguida de un cultivo selectivo, permite aislar diversas cepas microbianas para su análisis posterior.

Fuente: Liu, X., et al. Un ensayo de alimentación oral bacteriana con mosquitos tratados con antibióticos. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra la disección del intestino medio del mosquito para aislar bacterias intestinales. El intestino medio se extrae del tracto digestivo, se homogeneiza para liberar las bacterias y se coloca en el árbol de ágar nutritivo para cultivar colonias bacterianas.

Toma un ratón control con microbiota intestinal normal y un ratón experimental con microbiota intestinal agotada. El agotamiento compromete la integridad de la barrera intestinal.Esto permite que las bacterias se transloquen a través del vaso sanguíneo hacia el tejido hepático.Inyectar ambos ratones con el virus de la hepatitis B o el plásmido del VHB para inducir una infección por VHB en el tejido hepático.En el ratón control, la célula T detecta una célula hepática infectada mediante la...

Comienza con un cultivo de biosensores bacterianos suspendido en un medio.Estas bacterias modificadas producen un factor de transcripción que, al unirse a un metabolito fecal específico, activa un promotor asociado a un gen reportero fluorescente.A este cultivo, añade una muestra hecesal humana filtrada que contenga metabolitos, como el lactato, que participan en las interacciones huésped-microbioma.Diluye esta mezcla con un medio fresco para mantener un volumen de reacción óptimo.Incuba sin...

Comienza con un modelo de rata con suturas atadas alrededor de los dientes molares superiores para apoyar la colonización bacteriana.Unta repetidamente las suturas con una bacteria patogénica oral que cause enfermedad de las encías usando una solución similar a un gel.Las bacterias colonizan las encías alrededor de las suturas.La colonización desencadena inflamación y daña los tejidos.Las bacterias liberan toxinas que se difunden a través de los tejidos dañados y entran en el torrente sanguíneo.

Fuente: Yang, E., et al. Aislamiento de comunidades bacterianas intracelulares individuales generadas a partir de un modelo murino de infección urinaria para análisis de células individuales posteriores. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el aislamiento manual de células epiteliales individuales que contienen comunidades bacterianas intracelulares de la vejiga de ratón infectada mediante micropipeteo oral, permitiendo el análisis posterior de poblaciones viables de E. coli asociadas al...

Fuente: Chen, Y. et al., Evaluación de la virulencia y patogénesis de la infección por Aeromonas en un modelo de Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra un ensayo de necrosis muscular en C. elegans (Caenorhabditis elegans) utilizando cepas patógenas de Aeromonas . Al alimentar con gusanos que expresan proteína fluorescente verde (GFP) en placas con semillas de Aeromonas, el ensayo modela la infección bacteriana y revela daños tisulares mediante imágenes de fluorescencia.

Fuente: Hu, Y. et.al., Análisis de interacciones entre endobióticos y microbiota intestinal humana utilizando sistemas de fermentación en baños in vitro. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el análisis de la producción de ácidos grasos de cadena corta por la microbiota intestinal humana en respuesta a exopolisacáridos. Esto pone de relieve la separación y cuantificación de los productos de fermentación microbiana mediante cromatografía de gases. Los resultados revelan que los...

Fuente: Lo, B. C., et al. Fibrosis intestinal inducida por infección crónica por salmonela. J. Vis. Exp. (2019)El vídeo demuestra la cuantificación de la carga bacteriana en un modelo murino de infección crónica con Salmonella typhimurium resistente a estreptomicina. Tras la eutanasia y la disección estéril, se extraen tejidos cecales y esplénicos, se homogeneizan con perlas de acero para liberar bacterias y se diluyen en serie. Las diluciones se placan sobre agar selectivo y se cuentan las...

Fuente: Figueroa, D. et al. Producción y visualización de esferoplastos y protoplastos bacterianos para caracterizar la localización de péptidos antimicrobianos. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo muestra la preparación de esferoplastos a partir de bacterias gramnegativas en forma de varilla. Las bacterias se cultivan en presencia de un antibiótico para formar filamentos alargados. Estos se lavan con una solución hipertónica y se tratan con un tampón de lisis para eliminar la pared celular externa.

Fuente: Sigal, N., et al. Purificación de ARN de Listeria monocytogenes cultivada intracelularmente en células macrófagas. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demuestra el aislamiento de bacterias patógenas internalizadas a partir de macrófagos derivados de la médula ósea (BMDM) infectados. Se permite que las bacterias se adhieran a las células huésped y las bacterias no adheridas son arrastradas. Tras la internalización, se añade un antibiótico para eliminar bacterias no internalizadas. Las...

Fuente: Temkin, M. I. et al. Ensayos de cocultura de alto rendimiento para la investigación de interacciones microbianas. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo muestra un ensayo in vitro para estudiar las interacciones microbianas entre Corynebacterium propinquum y Staphylococcus en un cocultivo.

Fuente: Madenspacher, J. H. y Fessler, M. B. Un método no invasivo y técnicamente no intensivo para la inducción y fenotipado de neumonía bacteriana experimental en ratones. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra el proceso de cuantificar la carga bacteriana en el bazo de un ratón infectado para evaluar la gravedad de la infección. El bazo homogeneizado se diluye en serie y se coloca en placas para determinar la carga bacteriana total. Los datos resultantes proporcionan información sobre las...

Tomemos cultivos de células epiteliales de la vejiga urinaria humana en una placa multipozo.Incubar el cultivo de control con cloaces silvestres de tipo Enterobacter cloacae, una bacteria patógena con estructuras pili, similares a pilos, en la superficie bacteriana.La subunidad FimH del pili se une al receptor de la célula huésped, anclando las bacterias silvestres a la célula huésped.Incubar la cultura experimental con una cloaca mutante de Enterobacter sin FimH.Sin FimH, las bacterias...

Tomemos suspensiones de una cepa resistente a antibióticos de una bacteria patógena.Trata una suspensión con un compuesto antibiótico corto que rompe la membrana y la otra con el compuesto corto y con un compuesto más largo que intercala la membrana.Incuba ambas suspensiones con agitación. Estos compuestos imitan la estructura de la bicapa lipídica, permitiendo su inserción espontánea en las membranas bacterianas.El compuesto corto abarca solo una parte del grosor de la membrana, creando una...

Fuente: Brown, A. O., et al. Visualización de Streptococcus pneumoniae en Microlesiones Cardíacas y Remodelación Cardíaca Posterior. J. Vis. Exp. (2015).Este vídeo demuestra la visualización microscópica de microlesiones bacterianas en el tejido cardíaco de ratón. El corazón de un ratón infectado con Streptococcus pneumoniae se extrae, lava y fija antes de ser procesado para obtener secciones coronales. Estas secciones se tiñen con hematoxilina y eosina y se examinan al microscopio para...

Fuente: Pava-Ripoll, et al. Detección de patógenos bacterianos transmitidos por alimentos en moscas de la suciedad individuales. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demuestra un método basado en PCR que amplifica el ADN bacteriano objetivo de muestras de moscas enriquecidas utilizando tabletas específicas de patógenos, permitiendo la detección de fluorescencia en tiempo real y el análisis de curvas de fusión para confirmar la presencia de patógenos transmitidos por alimentos en insectos individuales.

Fuente: Calatayud Arroyo, M., et al. Evaluación de la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz intestino-microbio in vitro. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra un modelo intestino-microbio in vitro para estudiar la viabilidad bacteriana. Se incuba un cocultivo de células Caco-2 y HT29-MTX con bacterias pretratadas bajo condiciones digestivas simuladas. Se evalúa la integridad de la barrera epitelial utilizando resistencia eléctrica transepitelial, y se recogen...

Fuente: Chen, H., et al. Detección específica y precisa del patógeno de la reforestación de cítricos Candidatus liberibacter spp. mediante PCR convencional en muestras de tejido de hojas cítricas. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra la extracción de ADN genómico total de tejido foliar de cítricos infectado con una bacteria patógena. El protocolo permite una recuperación fiable de ADN para la detección posterior basada en PCR del patógeno limitado por el floema.

Source: Pett, N., et al. T4 Bacteriophage and E. coli Interaction in the Murine Intestine: A Prototypical Model for Studying Host-Bacteriophage Dynamics In Vivo. J. Vis. Exp. (2024).This video demonstrates the in vivo interaction between T4 bacteriophage and E. coli in the murine intestine, and the fecal spot plating method to quantify their coexistence by measuring bacterial colonies and phage plaques.

Source: Alshehri, M. et. al., Organotypic Tissue Model Systems for Investigating Host-Pathogen Interactions In Vitro. J. Vis. Exp. (2025)This video demonstrates a co-culture model using multi-species oral biofilms and human oral epithelium. It highlights epithelial immune activation and enables the downstream analysis of host-pathogen interaction.