Inyección intraperitoneal de lipopolisacáridos bacterianos en ratones para estudiar las respuestas inmunitarias sistémicas

Resumen

Fuente: Radulovic, K., et al. Inyecciones de lipopolisacáridos en ratones para simular la entrada de productos de origen microbiano tras la ruptura de la barrera intestinal. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo muestra un procedimiento paso a paso para inyectar lipopolisacáridos (LPS) en ratones de forma intraperitoneal para inducir inflamación sistémica.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.

1. Inyección intraperitoneal de lipopolisacáridos (LPS) en ratones
   1. Aspira la solución de trabajo LPS en una jeringuilla de 0,5 mL con una aguja de 30 G en un flujo de aire laminar.
   2. Pesa a las hembras C57Bl/6 ratones (de seis a diez semanas de edad) y calcula la cantidad de LPS que se inyectarán: 10 μL (2 μg)/g de peso corporal.
      NOTA: Por ejemplo, si un ratón pesa 20 g, entonces es necesario inyectar 20 g x 10 μL = 200 μL de solución de trabajo LPS.
   3. Manipula al ratón con suavidad pero firmeza y sujétale con una mano. Asegúrate de que el animal pueda respirar con normalidad pero sin girar durante la sujeción.
   4. Inclina ligeramente la nariz del ratón hacia el suelo para exponer el abdomen a la inyección. Localiza la línea media del abdomen y el lugar de inyección en la parte baja del abdomen, a la izquierda o derecha desde la línea media. Inyectar solución salina tamponada con fosfato (PBS) intraperitonealmente (i.p.) en lugar de LPS en ratones control.
   5. Con la mano alzada, inyecta el volumen adecuado (el volumen calculado en el paso 1.2) de la solución de trabajo LPS. Asegúrate de que la aguja haya entrado en la cavidad peritoneal, ya que de lo contrario pueden producirse inyecciones erróneas en la capa muscular abdominal. Aun así, no penetres demasiado profundo con la aguja en la cavidad peritoneal para evitar lesionar órganos internos situados en esa zona.
   6. Devuelvo cuidadosamente al animal a la jaula con hasta 5 ratones por jaula.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, San Diego, CA, EE. UU.	tlrl-eblps
Jeringuilla de insulina Omnican 50 de un solo uso	B. Braun Melsungen, Melsungen, Alemania	9151125