Preparación del tejido de vejiga de ratón para la visualización de infecciones bacterianas

Abstract

Fuente: O'Brien, V. P., et. al., Infección urinaria recurrente de Escherichia coli desencadenada por exposición a la vejiga a Gardnerella vaginalis en ratones. J. Vis. Exp. (2020)

Este vídeo demuestra el uso de microscopía electrónica de barrido para visualizar la colonización bacteriana y las interacciones huésped-patógeno en el epitelio de vejiga de un modelo murino preinfectado.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.

1. Obtención de imágenes de las vejigas mediante microscopía electrónica de barrido

   NOTA: Este procedimiento puede realizarse en cualquier momento en el que se desee la visualización del urotelio. Como se indica en la Figura 1 (cajas moradas), las interacciones uropatógenas entre E. coli (UPEC) y uroteliales se visualizan mejor entre 6 h y 24 h tras la inoculación UPEC durante la fase de formación del reservorio, y la exfoliación urotelial provocada por

Results

Figura 1. Esquema del modelo de ratón. La línea temporal se resalta para reflejar las fases o procedimientos del modelo descritos en el protocolo. Fase 1 (naranja): Establecimiento de reservorios intracelulares de E. coli uropatógeno.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
30G x 1/2 agujas	BD	305106	Para catéteres
Hemostat de pinza recta de 5 1/2"	McKesson	487377	Fijación in situ de la vejiga
Recubridor ACE 600 Sputter	Leica		Procesamiento de muestras SEM
Un muñón de SEM de aluminio	Ted Pella	16111	Procesamiento de muestras SEM
Cloruro de calcio	EMS	12340	Fijación in situ de la vejiga
Pestaña adhesiva de carbono conductor	Ted Pella	16084-1	Procesamiento de muestras SEM
Pintura plateada conductora	Ted Pella	16034	Procesamiento de muestras SEM
Secador de puntos críticos CPD 300	Leica		Procesamiento de muestras SEM
Clip metálico de citoembudo	Simport	M964B	Análisis de orina citospinado
Etanol	EMS	15050	Procesamiento de muestras SEM
Glucosa	Sigma	G7528	Para NYCIII G. vaginalis medio de crecimiento
Glutaraldehído	EMS	16320	Fijación in situ de la vejiga
Kit de tinción Hema 3	Fisher	23123869	Análisis de orina citospinado
HEPES	Cellgro	25-060-Cl	Para NYCIII G. vaginalis medio de crecimiento
Iridio	Ted Pella	91120	Procesamiento de muestras SEM
Merlin FE-SEM	Zeiss		Microscopio electrónico de barrido
Purificador de agua Milli-Q	Millipore	IQ-7000	Procesamiento de muestras SEM
Tetróxido de osmio	EMS	19170	Procesamiento de muestras SEM
Paraformaldehído	EMS	15710	Fijación in situ de la vejiga
Tubería de polietileno	Intramédico	427401	para catéteres
Proteosa Peptone #3	Fisher	DF-122-17-4	Para NYCIII G. vaginalis medio de crecimiento
Cuchilla de afeitar de doble filo recubierta de PTFE	EMS	72000	Cortar vejigas para el MEB