Preparación de un cultivo hemolítico de Staphylococcus aureus para estudios de interacción huésped-patógeno

Resumen

Fuente: Behera, R.K. et al., Un método basado en fluorescencia para estudiar la regulación génica bacteriana en tejidos infectados. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra la preparación de cultivos hemolíticos de Staphylococcus aureus para estandarizar el crecimiento bacteriano y lograr la sincronización metabólica para estudios de interacción huésped-patógeno.

Protocolo

1. Preparación del inóculo bacteriano
   1. Cepas de Staphylococcus aureus de interés para aislamiento en placas de agar sanguíneo a partir de un stock de glicerol congelado. Incubar a 37 °C durante 16–24 horas para confirmar fenotipos hemolíticos basados en su capacidad para lisar glóbulos rojos (glóbulos rojos) y formar zonas transparentes y claras.
   2. Inicia cultivos nocturnos inoculando colonias individuales de cada cepa a 4 mL de caldo de soja tríptico (TSB) en tubos de vidrio estériles. Gira los tubos a 37 °C durante 16–24 horas en un rodillo de tubos ajustado aproximadamente a un ángulo de 70° y 70 rotaciones por minuto (RPM).
   3. Utiliza un espectrofotómetro para medir la densidad óptica a 600 nm (OD₆₀₀) de los cultivos del paso 2.1.2. Usa un medio estéril como referencia óptica (en blanco). Diluir estas células a un OD₆₀₀ de 0,05 en 25 mL de caldo de soja tríptico estéril (TSB) en matrazas DeLong separadas de 125 mL (relación 5:1 matraz/volumen) e incubar los cultivos en baño maria (para una transferencia adecuada de calor a los cultivos), agitando a 280 RPM y ajustando a 37 °C.
      NOTA: El crecimiento del inóculo puede realizarse de diversas maneras; Se presenta un método para hacer crecer células hasta una fase exponencial. En cualquier caso, es importante utilizar consistentemente el mismo método para preparar las células para la inoculación.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
5% Sangre de oveja	Hardy Diagnostics (Santa María, CA)	A10
Baño-maria de agitación orbital	New Brunswick Innova	NA
Caldo de soja tríptico	VWR	90000-376
Espectrofotómetro UV-visible	Beckman Coulter-DU350	NA