Imágenes en vivo de las interacciones huésped-patógeno en embriones de pez cebra infectados con Mycobacterium abscessus

Resumen

Fuente: Bernut, A., et al. Desciframiento e imagen de la patogénesis y cordón de Mycobacterium abscessus en embriones de pez cebra. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo demuestra un protocolo que utiliza embriones transgénicos de pez cebra que expresan macrófagos fluorescentes e infectados con la cepa rugosa fluorescente de Mycobacterium abscessus para visualizar las interacciones huésped-patógeno. Revela cómo el cordón extracelular permite la evasión inmunitaria, promoviendo la supervivencia bacteriana y el daño a las células del huésped.

Protocolo

1. Imagen en vivo de la infección por M. absceso

1. Montar embriones anestesiados con tricaína en agarosa con punto de fusión bajo al 1% en una placa de Petri de 35 mm antes de las observaciones de microscopía de epifluorescencia. Utiliza una placa de fondo de cristal para microscopía confocal invertida o una lámina de depresión de cavidad única para microscopía confocal vertical. Orientar el embrión en la posición deseada y cubrir la agarosa solidificada con agua de pescado que contenga tricaína.
2. Utilice un microscopio de epifluorescencia con un objetivo 10 X para obtener imágenes secuenciales de fluorescencia y transmisión del embrión completo. Alternativamente, utiliza un microscopio confocal con objetivos 40X o 63X para visualizar la actividad de las células inmunitarias tras una infección.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Agarosa de baja fusión	Sigma-Aldrich
Sal de metanosulfonato de etil 3-aminobenzoato (Tricaine)	Sigma-Aldrich	A5040