Realización de cromatografía de capa delgada para evaluar la degradación de exopolisacáridos bacterianos

Resumen

Fuente: Hu, Y., et al. Análisis de las interacciones entre endobióticos y microbiota intestinal humana utilizando sistemas de fermentación in vitro en baños. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra el uso de la cromatografía de capa delgada (TLC) para evaluar la degradación de exopolisacáridos (EPS) por la microbiota fecal humana. Los fragmentos de EPS en los sobrenacionantes de fermentación se separan según su tamaño y polaridad usando TLC, y luego se visualizan como bandas de colores tras una tinción específica de carbohidratos.

Protocolo

1. Degradación de exopolisacáridos (EPS) por la microbiota fecal humana

1. Carga 0,2 μL de sobrenadantes fermentados sobre placas de aluminio de cromatografía de capa fina (TLC) con gel de sílice pre-recubierta, y luego seca con un secador de pelo.
2. Desarrolla las placas con 20 mL de una solución de ácido fórmico/n-butanol/agua (6:4:1, v:v:v) y seca con un secador de pelo.
3. Deja remojar las placas en el reactivo de orcinol para teñirlas y luego secarlas con un secador de pelo.
   1. Prepara reactivos de orcinol disolviendo 900 mg de lichenol en 25 mL de agua destilada, y luego añadiendo 375 mL de etanol. Como resultado, el ácido sulfúrico concentrado debe añadirse lentamente y la solución mezclarse completamente.
4. Calienta las placas a 120 °C durante 3 minutos en un horno para horno y evalúa la degradación del EPS midiendo las bandas de TLC.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Horno horno	Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	Úsalo para calentar y hornear
Etanol	Sigma-Aldrich	E7023	Uso para preparar vitamina K1
Ácido fórmico	Sigma-Aldrich	399388	Usado para TLC
Lichenol	Solarbio	C8380	Uso para preparar la placa de color
n-Butanol	ChemSpider	71-36-3	Usado para TLC
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Se usa para preparar reactivos de orcinol
Ácido sulfúrico	Sigma-Aldrich	150692	Se usa para preparar reactivos de orcinol
Chapas de aluminio TLC	MerckMillipore	116835	Usado para TLC