Métodos para grabaciones de parche Capacidad de la pinza del cáliz

Resumen

Se demuestra las técnicas básicas para la grabación de presináptica de patch clamp en el cáliz de Held, un mamífero nervioso central terminal nerviosa del sistema. Registros eléctricos de la terminal presináptica permitir la medición de potenciales de acción, las corrientes de los canales de calcio, la fusión de vesículas (exocitosis) y la absorción de la membrana posterior (endocitosis). La fusión de vesículas que contienen neurotransmisores provoca la membrana de la vesícula que se añade a la membrana celular del cáliz. Este aumento en la cantidad de membrana celular se mide como un aumento de la capacidad. La consiguiente reducción de capacidad indica la endocitosis, el proceso de absorción de la membrana o la eliminación de la membrana del cáliz. Endocitosis, es necesario mantener la estructura del cáliz, y también es necesario para formar vesículas que se llenará con el neurotransmisor de la exocitosis eventos futuros. Grabaciones de capacitancia en el cáliz de Held han hecho posible medir directamente y con rapidez la liberación vesicular y la endocitosis posterior en un terminal nervioso SNC de los mamíferos. Además, la actividad postsináptica correspondientes se pueden medir simultáneamente mediante el uso de grabaciones de pares. Por lo tanto una imagen completa de la actividad eléctrica presináptica y postsináptica en la sinapsis del sistema nervioso central que se puede lograr utilizando esta preparación. En este caso, los métodos para la preparación de corte, las características morfológicas para la identificación de los cálices de las técnicas de Held, parche básico de sujeción, y los ejemplos de las grabaciones de capacidad para medir la exocitosis y la endocitosis se presentan.

Protocolo

Setup Patch Clamp:

Óptica: La óptica es muy importante encontrar un buen celular, y para establecer la posición de la misma.

Trate de obtener una imagen clara de las células: los bordes afilados, aspecto suave de la célula.

Escanear todo el campo en busca de buenas células MNTB principal con cáliz unido. Gire plato en busca de los cálices desde diferentes ángulos. En un primer momento, está bien practicar en forma de globo terminal.

Recogida de células en la superficie de corte, o en la capa de 2 ^º de la célula. Objetivo de la ....