Cuantificación de la carga bacteriana tisular en un modelo murino de infección intestinal crónica

Abstract

Fuente: Lo, B. C., et al. Fibrosis intestinal inducida por infección crónica por salmonela. J. Vis. Exp. (2019)

El vídeo demuestra la cuantificación de la carga bacteriana en un modelo murino de infección crónica con Salmonella typhimurium resistente a estreptomicina. Tras la eutanasia y la disección estéril, se extraen tejidos cecales y esplénicos, se homogeneizan con perlas de acero para liberar bacterias y se diluyen en serie. Las diluciones se placan sobre agar selectivo y se cuentan las colonias visibles para estimar la carga bacteriana por gramo de tejido en los sitios intestinales y sistémicos.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.

1. Preparación de cultivos de Salmonella Typhimurium ΔAroA para gavage oral de ratones

1. A partir de un stock congelado de glicerol de S. Typhimurium ΔAroA, preparar una placa de raya utilizando agar Luria-Bertani (LB agar) que contenga 100 μg/mL de estreptomicina con un lazo inoculante estéril. Incubar durante la noche a 37 °C. Las placas de raya pueden almacenarse hasta una semana a 4 °C.
2. Un día antes de la infección, prepara el antibiótico....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tubos de bloqueo de fondo redondo de 2 ml con cierre seguro	Eppendorf	22363344
Cuentas de acero inoxidable	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
Puntas de pipeta de orificio grande	Fisher	2707134
Placas megabloque de 2 mL	Sarstedt	82.1972.002
Agujas de gavage	FST	18061-22
Sulfato de estreptomicina	Sigma	S9137
Molino mezclador	Retsch	MM