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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.
1. Tomar muestras de la luz vaginal para cuantificar la carga de GBS
- Preparar un tubo microcentrífuga de 1,5 ml por ratón añadiendo 100 μl de solución salina tamponada con fosfato (PBS). Justo antes de tomar el hisopo, prehumedece el hisopo en PBS.
- Sujeta al ratón e introduce el hisopo 10 mm en el lumen vaginal. Gira suavemente el hisopo 4 veces en sentido horario y 4 veces en sentido contrario, aplicando una ligera presión en la pared vaginal.
- Transfiere el hisopo al tubo microcentrífuga de 1,5 ml con 100 μl de PBS. Antes de la placa, haz un vórtice en el tubo de la microcentrífuga durante ~15 segundos para liberar las bacterias del hisopo. Diluir en serie cada muestra en PBS y placar 20 μl de diluciones 1:10 a 1:10.000 en placas de agar de medio diferencial preparadas según las instrucciones del fabricante. Incubar las placas a 37 °C durante 24 horas. Las colonias de Streptococcus del Grupo B (GBS) aparecerán de color rosa brillante o malva. Otras floras endógenas serán inhibidas o aparecerán como colonias azules, blancas o grises.