Infección urinaria asociada a catéter en un modelo murino

Resumen

Fuente: Conover, M. S., et al., J. Establecimiento y caracterización de ITU y CAUTI en un modelo murinho. J. Vis. Exp. (2015)

Este vídeo muestra el procedimiento para ensamblar e implantar un catéter transuretral en una ratona, seguido de la inoculación bacteriana para establecer la infección urinaria asociada al catéter e investigar las interacciones hospedador-patógeno mediadas por biofilm.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.

1. Protocolo modelo CAUTI (Infección urinaria asociada a catéter), Preparación de aguja para catéter para modelo CAUTI

1. Quita la tapa de la aguja de 30 G. Corta un trozo de tubo PE10 de 7 mm (polietileno 10) y un trozo de tubo de silicona de 5 mm como RenaSIL. Pasa la aguja con tubo PE10 hasta que toque la base de la aguja.
2. Luego alimenta la pieza de 5 mm sobre la aguja que contiene PE10. Los conjuntos de agujas con los rayos UV (ultravioleta) se esterilizan durante la noche.
   NOTA: Al cargar el tubo de silicona, deja aproximadamente 1 mm del tubo pasando de la punta de la aguja.

2. Preparación de inoculo bacteriano OG1RF de E. faecalis

1. Prepara el inóculo OG1RF comenzando 48 horas antes del día de la inoculación. Haz una raya OG1RF sobre una placa de BHI (infusión cerebral y corazón) desde una culata congelada.
2. Elige una colonia e inocúlala en 10 ml de BHI y hazla crecer estáticamente durante 18 horas a 37 °C. Centrifuga el cultivo y lava el pellet (3 veces) en volúmenes de 1 ml de PBS estéril 1x.
3. Resuspende el pellet bacteriano en 1x PBS (solución salina tamponada con fosfato). Mide la densidad óptica bacteriana y ajusta la concentración al tamaño deseado del inoculo. La concentración estándar del inóculo utilizado es^10,7; sin embargo, esto puede variar debido al diseño del estudio

3. Implantación de catéter

1. Limpia la estación de trabajo con etanol al 70% y cubre la zona con una cubierta absorbente (o usa una campana de flujo estéril).
2. Coloque la aguja del catéter en una jeringuilla vacía de 1 ml (TB o tuberculina). Corta un tramo de parafilm de 1 pulgada cuadrada y pon un poco de lubricante quirúrgico (aproximadamente del tamaño de una moneda de diez centavos) encima.
   NOTA: Se utilizan dos agujas diferentes para la deposición del catéter y para el inóculo, con el fin de minimizar la inoculación accidental debido a la manipulación mecánica necesaria para la implantación del catéter. Esto también permite la comodidad de preparar menos agujas de inoculación.
3. Anestesiar ratones C57BL/6 colocándolos en un tarro de cristal de 32 onzas que contiene una bola de infusor de té con bolas de algodón remojadas en 3 ml de isoflurano o una cámara de vaporizador (siguiendo el protocolo del fabricante) hasta que estén inconscientes pero respirando normalmente (1 respiración/segundo).
4. Luego coloca el ratón boca arriba sobre una toalla de papel y abre las patas. Cubrir la nariz del ratón con un cono nasal o un tubo cónico de 50 ml con bolas de algodón que contengan una pequeña cantidad (aproximadamente 1-2 ml) de isoflurano.
   PRECAUCIÓN: El isoflurano es un anestésico inhalable. Úsalo en un lugar bien ventilado y minimiza la inhalación por parte del investigador.
5. Palpa suavemente la vejiga para inducir la micción y asegurar que la vejiga esté vaciada. Limpia la zona periuretral con una toallita 100% etanol.
6. Desinfecta la zona periuretral con una solución de povidona-yodo al 10% utilizando un aplicador de punta de algodón. Aplica primero la aguja/jeringuilla de inoculación, apuntando primero, en el lubricante quirúrgico.
   NOTA: El yodo de povidona se utiliza para la implantación de catéteres, que es una solución aséptica más fuerte que el alcohol. La implantación del catéter requiere más manipulación mecánica para insertar el catéter y, por tanto, tiene un mayor potencial de contaminación.
7. Introduce el catéter en la abertura uretral. Una vez dentro, usa pinzas para empujar la pieza (de 7 mm PE10) hacia la vejiga, empujando así el catéter pequeño (de silicona de 5 mm) y depositándolo en la vejiga. Retira la aguja, con el tubo de 7 mm aún conectado, inmediatamente.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Material para la preparación de catéteres y agujas:
Agujas de 30 g	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0,3 mm x 13 mm)
Tubería de polietileno PE10	BD	427400	Diámetro interior -0,011 in (0,28 mm); diámetro exterior – 0,024 in (0,61 mm)
RenaSIL 025 tubos de silicio curados al platino	Braintree Scientific, Inc	SIL 025	diámetro interior-0,012 x diámetro exterior 0,025, bobina de 25 pies
Material para las infecciones:
Isofluorano – Isothesia	Mayordomo Schein	29405	250 ml
Tarro de vidrio transparente de lados rectos	Persecución de Kimble	5413289V 21
Infusor de té de acero inoxidable	Schefs-Amazon		Infusor de té a granel Premium de Schefs - Acero inoxidable - Gran capacidad -
Bolas de algodón no estériles	Fisherbrand	22-456-880
Tubos Falcon de 50 ml	VWR	89039-660
Isotec 3 - vaporizador	Ohmeda	1224478
Golpe en la oreja	Fisher Scientific	13-812-201	(cuando fuera necesario)
Solución de betadina	Solución de betadina		Solución tópica de Povidie-yodo al 10%
Bastoncillos de cotón	Fisher Scientific	22-037-924	6 pulgadas
Pañales para banco	Fisherbrand	14206 63	Almohadillas absorbentes (tapetes de 20"X36")
Lubricante quirúrgico	Surgilube	0281-0205-36
Tijeras diseccionadoras	Herramientas de ciencia fina, INC	14084-08
Pinzas Micro-Adson	Herramientas de ciencia fina, INC	11018-12
Jeringuilla de 1 ml	BD	309659	Punta de engobe de tuberculina
Parafilm	Bemis	PM996	4 pulgadas x 125 PIES
Rack Eppendorf	Fisherbrand	05-541-1
Tubos Eppendorf	MIDSCI	AVX-T-17-C
Extracción de catéteres, vejigas y riñones:
Homogeneizador	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
Tubo de fondo redondo de polipropileno de 5 ml	BD	352063	para la homogeneización de órganos
Papel de cocina	Georgia-Pacific
Etanol	Pharmco-AAPER	11100020S	200 proof
Placas de poliestireno transparente Costar™ de 96 pozos	Corning	3788
1x Fosfato sodio	Sigma-Aldrich	P3813
BRANSONIC Limpiador ultrasónico 1210	Corporación Ultrasónica de Branson	1210