Terapia de luz azul para infecciones bacterianas resistentes a medicamentos en heridas de quemaduras en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Wang, Y., et al. Investigación in vivo de la terapia antimicrobiana de luz azul para infecciones por quemaduras de Acinetobacter baumannii multirresistentes mediante imágenes de bioluminiscencia. J. Vis. Exp. (2017)

Este vídeo muestra el procedimiento para tratar infecciones de quemaduras causadas por bacterias bioluminiscentes y resistentes a medicamentos en ratones mediante terapia de luz azul, seguido de imágenes bioluminiscentes para monitorizar la eficacia del tratamiento.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado institucional de animales y la junta veterinaria JoVE.

1. Terapia antimicrobiana de luz azul para infección por A. baumannii en ratones

1. Anestesiar a los ratones con una inyección intraperitoneal de un cóctel de ketamina y xilazina (100 mg/kg - 20 mg/kg). La ausencia del reflejo palpebral sugiere una profundidad anestésica adecuada.
2. Dividir aleatoriamente los ratones en un grupo tratado con aBL (n = 10) y un grupo de control no tratado (n = 10).
3. Para el grupo tratado con luz azul antimicrobiana (aBL), cubre los ojos del ratón con papel de aluminio para evitar la sobreexposición a la luz. Coloca las quemaduras del ratón directamente bajo el diodo emisor de luz (LED), con la tapa de una placa de Petri de 35 mm bajo el abdomen del ratón para mantener la espalda horizontal.
4. Sustituye el medidor de potencia/energía mencionado en el paso 3.5 por un ratón en una placa de Petri cuadrada. Ajusta la altura del ratón a una posición en la que la distancia entre la apertura del LED y la superficie de la quema del ratón sea igual a la que hay entre la apertura del LED y el nivel del sensor de luz del medidor de potencia/energía.
5. Irradia las quemaduras infectadas a una irradiancia de 100 mW/^cm2. Administrar aBL en dosis de 72 J/^{cm 2} hasta alcanzar una dosis total de 360 J/^{cm 2} (por ejemplo, 0, 72, 144, 216, 288 y 360 J/^{cm 2}). Después de cada dosis de luz, realiza imágenes bioluminiscentes para los ratones.
6. Para el grupo de control no tratado, realizar imágenes bioluminiscentes de las quemaduras del ratón, utilizando los mismos intervalos de tiempo que se emplearon para el grupo tratado con aBL.
7. Antes de la recuperación de los ratones, colócalos sobre la camilla quirúrgica calentada con agua para evitar la pérdida de calor e hipotermia. Observa la actividad y el reflejo palpebral de los ratones hasta la recuperación. Después de la recuperación de los ratones, alojalos 2-3 por jaula.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
IVIS	PerkinElmer Inc, Waltham, MA	IVIS Lumina Serie III	Imagen preclínica in vivo
LED de diodo emisor de luz	VieLight Inc, Toronto, Canadá	415 millas náuticas	Fuente de luz para iluminación
Medidor de potencia/energía	Thorlabs, Inc., Newton, NJ	PM100D	Detector de irradiancia de luz
Mouse	Laboratorios Charles River, Wilmington, MA	BALB/c	7-8 semanas de edad, 17-19 g de peso
Acinetobacter baumannii	Centro Médico Militar Brooke, Fort Sam Houston, TX	Aislado clínico	Deformación luminiscente diseñada
Solución Salina Tamponada con Fosfato, 1x Solución	Fisher Scientific	BP24384	Un tampón estándar de fosfato utilizado en muchos procedimientos biomoleculares
Puntas de pipeta Fisher Scientific Redi-Tip, 1-200 μL	Fisher Scientific	02-707-502	Puntas de pipete
Bloque de latón	Small Parts, Inc., Miami, FL	10 mm por 10 mm	Para la creación de quemaduras en ratones
Guantes Extreme Dragon PBI/Kevlar de alta temperatura	Superior Glove Works Ltd, Cheektowaga, NY	PBI83514	Guantes resistentes al calor
Platos Greiner	Sigma-Aldrich Co. LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
Placa eléctrica digital Corning	Compañía de Instrumentos Cole-Parmer, LLC	UX-84301-65	10" x 10", 220 VAC, para agua hirviendo
Camilla quirúrgica calentada con agua para ratones/ratas	Sistemas E-Z	EZ-211	Previene la pérdida de calor e hipotermia durante la cirugía
Pomada veterinaria	S&K Pharma, GmbH	Kerato Biciron 5%, Augensalbe	Pomada oftálmica para prevenir la sequedad ocular