Cambios morfológicos de imagen en bacterias mediante microscopía de fluorescencia de células vivas

Abstract

Fuente: Brzozowski, R. S. et al. Microscopía de fluorescencia de células vivas para investigar la localización de proteínas subcelulares y los cambios en la morfología celular en bacterias. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra la microscopía de fluorescencia de células vivas para visualizar cambios morfológicos en tiempo real en bacterias. Describe los pasos implicados en la obtención de imágenes, la adquisición en lapso de tiempo y la deconvolución para obtener imágenes de alta resolución en tiempo real.

Protocol

1. Imagen

1. El día del experimento, enciende el sistema de microscopio. Inicia el software de imagen (véase Tabla de Materiales) haciendo clic en el icono correspondiente en el escritorio. Inicializa el microscopio haciendo clic en la opción Inicializar microscopio (el botón que aparece con un microscopio) en el cuadro de diálogo de inicio del software. Asegúrese de que el objetivo esté completamente bajado usando el ajuste grueso del microscopio antes de la inicialización.
   NOTA: Tras la inicialización, deberían aparecer tres cuadros de diálogo adicionales además del menú de inicio: resolve3D, recogida de da....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agarose	Biorreactivos de Fisher	BP160-100	Grado de Biología Molecular - Baja EEO
FM4-64	Invitrogen	T3166	Microscopía
Plato de fondo de cristal	MatTek	P35G-1.5-14-C	Microscopía
Microscopio	GE	DeltaVision Elite	Soporte personalizado para microscopio invertido Olympus IX-71; Torre de iluminación personalizada y módulo iluminador de luz transmitida. Objetivos: PLAPON 60X (N.A. 1.42, WD 0.15 mm); OLY 100X OIL (N.A. 1.4, WD 0.12 mm); DIC Prism Nomarski para objetivo 100X; cámara CoolSnap HQ2; Ensamblaje SSI de 7 colores; Cámara de control ambiental: opaca.
PC190723	MilliporeSigma	3445805MG	Inhibidor de FtsZ
SoftWorx	GE		Software de imagen suministrado por el fabricante