Inmunotinción de microlesiones rellenas de bacterias en una sección de tejido cardíaco de ratón para imagen

Resumen

Fuente: Brown, A. O., y Orihuela, C. J. Visualización de Streptococcus pneumoniae en Microlesiones Cardíacas y Remodelación Cardíaca Posterior. J. Vis. Exp. (2015)

El vídeo demuestra la inmunotinción de secciones químicas fijadas de tejido cardíaco de ratón para visualizar bacterias patógenas localizadas dentro de microlesiones inducidas por infecciones. El proceso incluye lavado de tejidos, permeabilización de membrana, bloqueo de sitios inespecíficos, marcado de anticuerpos, contratinción nuclear y microscopía confocal para detectar y localizar racimos bacterianos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras animales han sido revisados y aprobados por el comité de ética animal correspondiente.

1. Infección

1. Obtén ratones BALB/c de ambos sexos entre las 10 y 12 semanas.
   NOTA: La cepa TIGR4 de Streptococcus pneumoniae serotipo 4 es un aislado clínico virulento que ha sido secuenciado.
2. Cultivar TIGR4 en caldo Todd-Hewitt a 37 °C con un 5% de_CO2 hasta que el cultivo alcance una densidad óptica de 620 nm (OD₆₂₀) de 0,5 (correspondiente a 1,0 × 10 8 unidades formadoras^{de colonias} [UFC]/ml). Pelletar el cultivo neumocócico mediante centrifugación du....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caldo Todd-Hewitt	Neogen	7161A
Compuesto O.C.T	Tek de tejido (Sakura Finetek)	4583
Triton X-100	Fisher Scientific (Acros)	9002-93-1
Suero normal para cabra	Abcam	ab7481
Antisuero antiserotipo 4 contra el neumococo	Instituto de Suero Statens	16747
Anticuerpo conjugado anticonejo de cabra FITC	Jackson ImmunoResearch	111-096-144
DAPI	Invitrogen	D1306
Fluorsave	Millipore	345789
Permount	Fisher Scientific	S70104
Ampicilina	Sigma	A9393
Portaobjetos de microscopio Tissue Tack	Polysciences, Inc	24216
Pomada Paralube Vet	Dechra	12920060
Kit de tinción de hematoxilina y eosina	no especificado		Estándar