Visualización del estrés oxidativo inducido por patógenos en C. elegans usando SKN-1 etiquetado con GFP

Abstract

Fuente: Naji, A., et al. Estudio del estrés oxidativo causado por los estreptococos del grupo Mitis en Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra el uso de SKN-1 marcado con proteína fluorescente verde en C. elegans para monitorizar el estrés oxidativo siguiendo la fluorescencia verde. Los gusanos expuestos a S. gordonii muestran una fuerte fluorescencia nuclear, lo que confirma el estrés inducido por patógenos, mientras que los alimentados con E. coli muestran fluorescencia verde difusa en el citoplasma, lo que indica una activación mínima de SKN-1.

Protocol

1. Observación de la localización de SKN-1 en respuesta a la infección por Streptococcus gordonii

1. Añadir ~100 larvas L4 a cada extracto de levadura Todd–Hewitt (THY) sembrado con Streptococcus y a cada medio de crecimiento nematodoico (NGM) en placa de agar sembrada con Escherichia coli (E. coli). Usa tres placas por cepa de bacterias. Incuba las placas durante 2 a 3 horas a 25 °C.
2. Después, retirar las placas de la incubadora, lavarlas con un tampón M9 modificado (M9W) y recoger las lombrices en tubos cónicos de 15 mL.
3. Lava los gusanos 3 veces....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Medios y productos químicos
Caldo BD Bacto Todd Hewitt	Fisher Scientific	DF0492-17-6
Tubos centrífugas cónicos estériles de polipropileno de 15 mL	Fisher Scientific	12-565-269
Azida de sodio	Sigma Aldrich	S2002-25G
Cloruro de tetramisol	Sigma Aldrich	L9756
Deslizamientos de tapa nº 1.5 de 18 mm x 18 mm	Fisher Scientific	12-541A
Agarose	Sigma Aldrich	A9539-50G
LD002	IdIs1	SKN-1B/C::GFP + rol-6(su1006)	Keith Blackwell