Ensayo basado en fluorescencia para investigar las interacciones de los receptores de macrófagos con antígenos bacterianos

Resumen

Fuente: Barbero, A. M., et.al. Ensayos de fluorescencia para el estudio de la interacción de Mycobacterium tuberculosis con el receptor inmunitario SLAMF1. J. Vis. Exp. ( (2025)

Este vídeo muestra un ensayo basado en fluorescencia para estudiar la interacción entre un receptor de macrófagos y antígenos de Mycobacterium tuberculosis . Los antígenos marcados con fluorescencia en un abrigo se incuban con extractos de proteínas de macrófagos, se reticulan, se marcan con anticuerpos y se visualizan mediante señales de fluorescencia superpuestas.

Protocolo

1. Interacción entre Mycobacterium tuberculosis y SLAMF1 mediante microscopía de fluorescencia

1. Reticulo bacteria-proteína
   1. Introduce cubiertas redondas de 12 mm en placas de cultivo de 24 pozos (1 cubierta por pozo) usando pinzas quirúrgicas de punta redonda.
      NOTA: Limpia bien las cubiertas con etanol al 70%. Si se desea, pueden ser autoclavadas o esterilizadas bajo luz ultravioleta durante 30 minutos.
   2. Incubar el cubo con 400 μL de 10 μg/mL de poli-D-lisina durante la noche a 4 °C. Cubrir la placa con papel de aluminio para protegerla d....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Anticuerpo secundario Alexa Fluor 488	Invitrogen	A21121	Para microscopía de fluorescencia
Anticuerpo primario anti-SLAMF1	BioLegend	306302	Para microscopía de fluorescencia
Aqua-Poly/Mount	Policiencias	18606-20	Medios de montaje
Cubiertas 12mm	HDA	-	Para ensayo de interacción por microscopía
EGS	ThermoFisher Scientific	21565	Para el tratamiento de reticulación
Formaldehído	Merck	K47740803613	Para el tratamiento de reticulación
Correderos de vidrio	Glass Klass	-	Para ensayo de interacción por microscopía
Glicina	Sigma	G8898	Para el tratamiento de reticulación
Imager.A2	Carl Zeiss	430005-9901-000	Microscopio de fluorescencia con módulo de iluminación Colibri 7
Poli-D-lisina	Sigma Aldrich	A-003-M	Para el tratamiento de las cubiertas
Rodamina B	Sigma Aldrich	21955	Para M. Tinción por tuberculosis