Monitorización de la colonización bacteriana de raíces de Arabidopsis thaliana en un sistema sin suelo

Resumen

Fuente: Harris, S. L., et al. Monitorización de la colonización bacteriana y el mantenimiento en raíces de Arabidopsis thaliana en un sistema hidropónico flotante. J. Vis. Exp. (2019)

Este vídeo demuestra un protocolo para monitorizar la colonización de bacterias asociadas a raíces en plántulas de Arabidopsis thaliana cultivadas en un sistema sin suelo. Tras la colonización, las bacterias son desplazadas por sonicación, luego diluidas, placadas e incubadas para formar colonias que reflejan la unión y viabilidad bacteriana.

Protocolo

Colección de bacterias para el recuento celular viable

NOTA: El número de bacterias por raíz de plántula puede determinarse en cualquier momento de incubación. La colonización puede monitorizarse entre 0 h y 18 h, mientras que el mantenimiento puede supervisarse a partir de las 18 h.

1. Retira las plántulas de la malla (Figura 1, paso 5). Coloca suavemente pinzas esterilizadas con llama debajo de las hojas (pero en el lado de la hoja de la malla) y pellizca ligeramente el tallo. Mueve las plántulas hacia arriba y alejándolas de la malla para desalojar la raíz sin romperla. Si la raíz se rompe, raspa suavemente la base de malla para recoger toda la longitud.
2. Elimina bacterias de las raíces de las plantas. Transfiere las bacterias a pozos de una placa de 24 pozos que contenga 1 mL de_{ddH 2}0. Sonica las muestras.
3. Cuantifica las bacterias en las raíces.
   1. Realizar diluciones en serie de 10 veces de las muestras sonicadas hasta una dilución de ^10-6 en medio de crecimiento bacteriano. Añade 50 μL de cada dilución a placas de agar individuales y extiende con perlas de vidrio estériles. Incubar placas a la temperatura óptima para bacterias hasta que las colonias individuales sean numerables.

Resultados

Figura 1: Ensayo para colonización bacteriana y mantenimiento en raíces de A. thaliana . Las plántulas de A. thaliana cultivadas sobre malla plástica esterilizada se transfirieron a un medio de crecimiento optimizado para bacteria...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placas de 24 pozos	BD Falcon	1801343
Llama
Pinzas
Incubadora			A temperatura óptima para el crecimiento de bacterias específicas
Agua estéril
Ultrasonicador
Accesorio de ultrasonicador de 24 clavijas			Para sonicar varias muestras a la vez. Se puede hacer individualmente
Cuentas de vidrio
Multipetter/Repetter
Placas estériles de 96 pozos			Para diluciones en serie. Puede ser reemplazado por tubos de Eppendorf
Semillas de Arabidopsis thaliana			Recomendamos el Centro de Recursos Biológicos Arabidopsis para las existencias de semillas
Pseudomonas simiae WCS417r