Fotoblanqueo de pigmentos cianobacterianos para la obtención de imágenes de proteínas reguladoras del crecimiento

Resumen

Fuente: Zhan, Y., et al. El fotoblanqueo permite la obtención de imágenes de superresolución del anillo FtsZ en el cianobacterio Prochlorococcus. J. Vis. Exp. (2018).

Este vídeo demuestra el procedimiento para el fotoblanqueo de pigmentos en células cianobacterianas utilizando luz de xenón en condiciones de frío para mejorar la imagen de fluorescencia de proteínas reguladoras del crecimiento.

Protocolo

1. Fotoblanqueo de los pigmentos de clorofila en un paso de bloqueo

1. Transfiere la cubierta al plato de tinte. Añade 50 μL de tampón bloqueante, que contiene detergente no iónico al 0,2% (v/v) y suero de cabra al 3% (v/v), sobre la cubierta.
2. Coloca toda la placa de tinción sobre hielo y muévela bajo la fuente de luz de xenón para el fotoblanqueo durante al menos 60 minutos, con una intensidad luminosa de 1.800 μmol fotones/^{m 2}·s.
3. Después de la fotoblanqueación y el bloqueo, retira cuidadosamente el buffer de bloqueo absorbiéndolo con el borde de una toalla de papel.
   NOTA: La intensidad de la luz de xenón es tan alta que se necesitan gafas de sol adecuadas para proteger los ojos. Mientras tanto, envuelve la fuente de luz y la placa con papel de aluminio para evitar fugas de luz, que pueden causar daños en los ojos. Revisa la capa de cubierta cada 15 minutos para asegurarte de que sigue húmeda. Si está seco, añade 50 μL de buffer bloqueante.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Partículas de poliestireno	Spherotech	PP-20-10	2,0-2,4 μm
Cubierta	Marienfeld	111580	18 mm ∅, Grosor nº 1
Etanol	Scharlau	ET00021000
Hidrobromuro de poli-L-lisina	Sigma-Aldrich	P9155	peso mol 70.000-150.000
Paraformaldehído	Sigma-Aldrich	158127
Solución de glutaraldehído, 50%	Sigma-Aldrich	340855
PBS	Sigma	P3813
Triton X-100	Sigma	T8787
Sal Sódica EDTA, 2-hidrato	Biotecnología del oro	E-210-500
Base de Trizma	Sigma	T1503
Lisozima	Sigma	L6876
Suero de cabra	Sigma	G9023
Fuente de luz XD-300 Xenón			250 W