Establecimiento de infección bacteriana en larvas de Drosophila

En este artículo

Resumen

Fuente: Hiroyasu, A., D et al., Extracción de hemocitos de larvas de Drosophila melanogaster para infección microbiana y análisis. J. Vis. Exp. (2018)

Este vídeo muestra el procedimiento para establecer una infección bacteriana en larvas de Drosophila colocándolas en una gota bacteriana y pinchándolas con una aguja de tungsteno. Las larvas se incuban luego en una placa de agar ranurada y rica en nutrientes para estudiar las interacciones huésped-patógeno.

Protocolo

1. Infección in vivo

Calienta la placa de agargarizado de zumo de fruta Drosophila a temperatura ambiente durante 15 minutos.
1. Añade 30 g de agar a 700 mL de agua y haz autoclave durante 40 minutos.
2. Disuelva 0,5 g de parabeno metilo en 10 mL de etanol absoluto.
3. Añade la solución de parabeno de metilo a 300 mL de concentrado de zumo de fruta.
4. Mezcla rápidamente el concentrado de zumo en la solución de agar autoclavado y dispensa 5 mL en placas de Petri de 10 × 35 mm.
5. Después de que los platos se hayan enfriado durante 15 minutos, guárdalos a 4 °C.
Prepara larvas de tercer estadio.
Coloca la pasta de levadura sobre una placa de agar. Haz un corte fino en la placa de agar por donde las larvas pueden migrar para evitar el secado (Figura 1A). Montar una aguja puntiaguda de tungsteno de 0,001 mm con pinzas de sujeción usando película de parafina (Figuras 1B, C).
Pipetear 50 μL de Coxiella burnetii expresora de alto título mCherry (5,95×10⁹ GE/mL) sobre la película de parafina bajo el microscopio estereoscópico y colocar las larvas en el charco de bacterias.
Coloca las larvas en el charco de bacterias, pinchalas con una aguja de tungsteno (Figura 3D) y transfierelas a una placa de agar (Figura 1E).
Transfiere el medio patógeno restante a la placa de agar y sella la placa con película de parafina.
Mantener las larvas en la placa en aire húmedo hasta el tiempo deseado tras la infección (Figura 1F). En este experimento, las larvas infectadas con C. burnetii permanecen en la placa durante 24 horas.

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Resultados

Figura 1: Infección in vivo. A) Se utilizan placas de agar de zumo de fruta de Drosophila y pasta de levadura para la incubación de larvas infectadas in vivo . Se hacen cortes en la placa de agar para facilitar ...