Infección intranasal por herpesvirus murino en ratones para evaluar las respuestas inmunitarias del huésped

Resumen

Fuente: Zhang, J., et al. P. Análisis de la señalización inmune innata en la evasión viral de la producción de citoquinas. J. Vis. Exp. (2014)

Este video demuestra la administración intranasal de herpesvirus murino en ratones para inducir una respuesta inmunitaria específica en el pulmón. Posteriormente, se procesa el tejido pulmonar para obtener sobrenadantes que contienen citoquinas, destinados a la evaluación posterior de las respuestas inmunitarias del huésped.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité local de cuidado animal institucional y por el comité de revisión veterinaria de JoVE.

1. Secreción de citoquinas mediante ELISA en ratones infectados con γHV68

1. Anestesie ratones macho y hembra emparejados por sexo, de 6 a 8 semanas de edad, de la cepa C57BL/6 (B6), mediante inyección intraperitoneal de 1,5 mg de ketamina/0,12 mg de xilacina, e inocule por vía intranasal 40 UFP (unidades formadoras de placas) de γHV68 en 40 µl. En diferentes momentos posteriores a la infección, sacrifique a los ratones mediante inhalación de CO₂ seguida de dislocación cervical.
2. Abrir el tórax con un corte lateral izquierdo a lo largo del esternón y cortar las costillas con tijeras afiladas. Recolectar los tejidos pulmonares.
3. Colocar la mitad del tejido pulmonar (lóbulo izquierdo) en tubos estériles de 1,5 ml con tapón roscado que contengan 500 µl de perlas de circonia/sílice de 1,0 mm. Añadir 1 ml de DMEM (medio de Eagle modificado por Dulbecco) frío sin suero al tubo y homogeneizar el tejido pulmonar mediante batido con perlas durante 30 segundos. Enfriar los tubos en hielo durante 2 minutos y repetir este proceso una vez más.
4. Centrifugar los tubos (15.000 x g durante 10 minutos) a 4 °C, recolectar el sobrenadante y medir la producción de citoquinas como se describe a continuación.
5. Medir las citoquinas utilizando kits comerciales de ELISA (ensayo inmunoenzimático) para citoquinas según las instrucciones del fabricante.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Kit de ELISA para CCL5 de ratón	R&D Systems	DY478
Perlas de Zirconia/Sílice de 1,0 mm	BioSpec Products	11079110z