Crecimiento viral y técnicas

Source: Tang, N., et al. Generating Recombinant Avian Herpesvirus Vectors with CRISPR/Cas9 Gene Editing. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the clonal isolation and PCR-based screening of recombinant herpesvirus following site-specific excision of a GFP marker. Fluorescence-activated cell sorting is used to isolate non-fluorescent infected cells, and junction PCR confirms retention of the target gene in GFP-negative clones.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the isolation of Arthrobacter bacteriophages from a soil sample using enrichment and plaque assay techniques. It highlights the infection, amplification, and visualization of phages as clear lysis zones formed on a bacterial lawn.

Source: Morales Vasquez, D., et al. Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the protocol for carrying out plaque assay–based viral titration for quantifying infectious virus levels in tissue sample collected from a virus–infected mouse model.

Source: Vijayraghavan, S., Kantor, B. A Protocol for the Production of Integrase-deficient Lentiviral Vectors for CRISPR/Cas9-mediated Gene Knockout in Dividing Cells. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the procedure for generating recombinant viral particles by transfecting embryonic kidney cells with plasmids encoding viral proteins and a gene of interest.

Source: Rustad, M., et.al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the purification of bacteriophages from a suspension containing host bacterial debris using a sucrose density gradient. It shows how the density gradient separates phages by buoyant density, enabling recovery of a visible band for resuspension and further analysis.

Source: Brauer, R. et al., Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates the synthesis and harvest of the influenza virus in fertilized chicken eggs. The virus is inoculated into the allantoic cavity, where it replicates in epithelial cells and buds into the allantoic fluid, which is then collected and stored for downstream applications.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates the propagation and harvesting of oncolytic herpes simplex virus in mammalian cell cultures, highlighting viral entry, replication, and the recovery of virus-loaded cells. It further shows methods for preserving infected cells for downstream processing.

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the purification of an oncolytic virus from infected mammalian cell cultures using nuclease treatment, sequential centrifugation, membrane filtration, and sucrose cushion centrifugation.

Source: Huang, D., et al. Mosquito-Associated Virus Isolation from Field-Collected Mosquitoes. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the step-by-step procedure for the in vitro isolation of mosquito-associated viruses from mosquito homogenates using fibroblast-like mammalian cells.

Source: Eggers, C. H. Phage-Mediated Genetic Manipulation of the Lyme Disease Spirochete Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).This video demonstrates the isolation of borrelial phage particles from a Borrelia burgdorferi suspension using polyethylene glycol-mediated phase separation. The sample is centrifuged, treated with a salt solution, and a molecular crowding agent to precipitate phages. Chloroform extraction is done to remove debris and concentrate phage particles. The purified phage...

Source: Pett, N., et al. T4 Bacteriophage and E. coli Interaction in the Murine Intestine: A Prototypical Model for Studying Host-Bacteriophage Dynamics In Vivo. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the purification of bacteriophages from bacterial cell lysates using sequential centrifugation, membrane filtration, chloroform extraction, centrifugal filtration, and buffer exchange to obtain a purified phage preparation.

Source: Van Lidth de Jeude, et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the process of producing viral particles through transfection of embryonic kidney cells with plasmid–polyethylenimine complexes, which leads to viral genome expression, particle assembly, and virus collection in the medium.

Source: Saragliadis, A., et al. Producing Gene Deletions in Escherichia coli by P1 Transduction with Excisable Antibiotic Resistance Cassettes. J. Vis. Exp.(2018)This video demonstrates preparation of a bacteriophage lysate containing transducing particles. A donor strain is infected, plaques form, and the soft agar overlay is processed with chloroform to yield a clarified lysate for downstream analysis.

Fuente: Weger-Lucarelli, J., et al. Aislamiento y Caracterización de un Virus Recombinante a Partir de un Clon Infeccioso del Virus del Zika del Nuevo Mundo. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la recuperación del virus infeccioso del Zika mediante la electrotransferencia de ARN transcrito in vitro. El proceso muestra cómo el ARN sintético inicia la infección y conduce a la replicación viral en células cultivadas.

Fuente: Mackler, R. M., et al. Ensamblaje y Purificación de Intasomas de Virus Espumosos Prototípicos. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la purificación de intasomas del virus espumoso prototípico (PFV) a partir de una suspensión mixta de proteína-ADN mediante extracción con sal y cromatografía de exclusión por tamaño, obteniendo complejos activos para análisis posteriores.

Fuente: Suzuki, Y., et al. Medición del ARN del virus del dengue en el sobrenadante de cultivo de células infectadas mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real. J. Vis. Exp. (2018).Este video demuestra el procedimiento para preparar muestras virales para el análisis mediante PCR cuantitativa (reacción en cadena de la polimerasa). Las muestras virales y los patrones de ARN se diluyen seriamente, se tratan con un tampón de proteinasa K y se incuban a temperaturas...

Fuente: Dembowski, J. A., et al. Purificación de ADN viral para la identificación de proteínas virales y celulares asociadas. J. Vis. Exp. (2017).Este video demuestra el aislamiento de complejos de ADN viral–proteína a partir de núcleos celulares mediante química click y purificación con perlas magnéticas. El protocolo incluye la marcación de genomas virales con nucleótidos modificados con alquino, biotinilación mediante una reacción click y unión a perlas magnéticas recubiertas con...

Fuente: Ding, J. et. al., Preparación de rAAV9 para sobreexpresar o silenciar genes en corazones de ratón. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra la purificación de partículas virales recombinantes a partir de células humanas de riñón transfectadas. El virus se libera mediante lisis por congelación-descongelación y se purifica utilizando gradientes de iodixanol con filtración asistida por copolímero de bloque.

Fuente: Rghei, A. D., et al. Producción de Vectores de Virus Asociado a Adenovirus en Pilas de Células para Estudios Preclínicos en Modelos Animales Grandes. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra la recuperación del virus adeno-asociado crudo a partir de células mamíferas transfectadas mediante lisis química y centrifugación, lo que permite la producción de AAV con alto rendimiento para aplicaciones de purificación posterior y terapia génica preclínica.

Fuente: Lopez Jr., M. A., et al. Detección y eliminación de la contaminación por nucleasas durante la purificación de la integrasa recombinante del virus espumoso prototípico. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la purificación de la integrasa viral marcada con polihistidina mediante cromatografía de afinidad al níquel. El protocolo utiliza una elución con gradiente de imidazol para aislar selectivamente la integrasa según su afinidad por la resina cargada con níquel.

Source: Rustad, M. et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates the amplification and recovery of infectious bacteriophages from E. coli cultures. It outlines the steps for plaque isolation, phage replication, controlled lysis, and purification.

Source: Wang, M., et al, Evaluation of T Follicular Helper Cells and Germinal Center Response During Influenza A Virus Infection in Mice. J. Vis. Exp. (2020).This video demonstrates intranasal infection of a mouse with a pathogenic influenza virus to establish a respiratory tract infection. The procedure outlines the administration of the virus into the nasal cavity. The virus enters host cells, replicates, and activates the immune system.

Source: Asad, S., et al. Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates antibody-dependent enhancement of Zika virus infection in human primary macrophages, using dengue antibody–virus complexes to model how cross-reactive antibodies facilitate Fcγ receptor–mediated viral entry and replication for studying infection mechanisms and immune interactions.

Source: Klaus, J. P., et al Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates how to measure arenavirus attachment to monkey kidney cells. The assay uses low temperatures to block endocytosis and isolate the virus binding step. The approach enables precise quantification of surface-bound virus particles under conditions that restrict internalization.

Source: Fernández-Fernández, R., et. al. Bacteriophage Removal from Infected Salmonella Cultures. J. Vis. Exp. (2024)This video demonstrates the use of exogenous LPS (Lipopolysaccharide) as a receptor mimic to inactivate lytic bacteriophages in Salmonella cultures. Through sequential incubation, centrifugation, and washing, phages are eliminated, resulting in a viable, phage-free bacterial suspension for downstream applications.

Fuente: Zhao, J., et al. Silenciamiento de microARN basado en el virus X de la papa (VbMS) en papa. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra el uso de Agrobacterium tumefaciens para entregar un constructo basado en el Virus X de la Papa (PVX) a plantas de papa cultivadas in vitro, con el fin de lograr el silenciamiento de microARN mediado por virus (VbMS). El método permite la supresión sistémica de un microARN diana, lo que posibilita a los investigadores estudiar su función en el desarrollo...

Fuente: Esposito, A. M.,et al. Ensayo de fusión de membranas virales activado por Cre-Lox de alto rendimiento para identificar inhibidores de la fusión de membranas del VIH-1. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra un ensayo fluorescente de co-cultivo para monitorear la transmisión viral de célula a célula. El ensayo utiliza un casete reportero de rojo a verde para visualizar la fusión de la membrana viral y evaluar la eficacia de compuestos de prueba en la inhibición de la entrada viral.

Fuente: Yates, J. G. E., et al. Producción de virus recombinante de la enfermedad de Newcastle de alto título a partir de líquido alantoideo. J. Vis. Exp. (2022)El video demuestra la purificación y concentración de partículas virales a partir de líquido alantoideo clarificado obtenido de huevos de gallina embrionados infectados con virus. Se muestra una serie de pasos de filtración y separación, incluyendo filtración de profundidad, filtración de flujo tangencial y ultracentrifugación en...

Fuente: Otter, C. J., et al. Infección de células epiteliales nasales primarias cultivadas en una interfase aire-líquido para caracterizar las interacciones entre el coronavirus humano y el huésped. J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra el crecimiento del coronavirus en células epiteliales nasales humanas cultivadas en una interfaz aire-líquido, imitando la infección y la replicación viral en la cavidad nasal humana.

Source: Zhang, L., et al. Immunofluorescent Labeling of Plant Virus and Insect Vector Proteins in Hemipteran Guts. J. Vis. Exp. (2021)The video demonstrates the preparation of gut tissue from a plant virus–infected insect vector for fluorescence imaging. Fixed guts were washed, permeabilized, and incubated with two fluorescent antibodies in a blocking solution—one targeting a viral antigen in vesicles, the other a vesicle-associated membrane protein. The tissue was counterstained for actin...

Source: Schaeffer, J. W., Chandler, et al. Detection of Viruses from Bioaerosols Using Anion Exchange Resin. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the detection of viruses from bioaerosols using an anion exchange resin. A liquid impinger containing the resin is used to capture viruses from the air. The resin is collected and treated with a virus lysis buffer containing carrier RNA. The lysate is transferred to a microcentrifuge tube for viral RNA isolation, followed by qRT-PCR to amplify...

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the process of performing a fluorescent plaque assay using recombinant vaccinia virus encoding red fluorescent protein (RFP) in fibroblast cells, followed by plaque isolation and purification for further analysis.

Source: Williams, S. M. et al. Novel Atomic Force Microscopy Based Biopanning for Isolation of Morphology Specific Reagents against TDP-43 Variants in Amyotrophic Lateral Sclerosis. J. Vis. Exp. (2015)This video demonstrates tapping-mode AFM to visualize phage–antigen interactions on a mica surface. It outlines the steps for antigen immobilization, phage binding, and high-resolution nanoscale imaging.

Source: DeMarino, C., et al. Purification of High Yield Extracellular Vesicle Preparations Away from Virus. J. Vis. Exp. (2019)The video demonstrates the separation of EVs from virions and other contaminants by density gradient centrifugation, followed by capture and concentration with hydrogel nanoparticles. Washed fractions are then ready for downstream identification of those enriched in EVs.

Source: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the processing of lentivirus-transduced mouse intestinal organoids for paraffin embedding, to enable their downstream analysis for assessing gene expression.

Source: Chen, H. et. al. Live Cell Imaging of the TGF-β/Smad3 Signaling Pathway In Vitro and In Vivo Using an Adenovirus Reporter System. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the preparation of luciferase-expressing breast cancer cells using recombinant adenoviruses for in vivo imaging.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Source: Stauffer, S. et al. In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the pH-dependent disassembly of influenza A virus (IAV) cores using gradient ultracentrifugation. It outlines glycerol gradient preparation, ultracentrifugation, and how different pH conditions affect IAV core disassembly.

Source: Philip, A. A., et al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the isolation of rotavirus double-stranded RNA from clarified cell lysates. It further illustrates the separation and visualization of genome segments through polyacrylamide gel electrophoresis.

Source: Philip, A. A., et. al., Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates a plaque assay technique to monitor rotavirus infection in epithelial cells. Trypsin activation enhances viral entry, and staining highlights viable cells, enabling visualization of infection-induced plaques.

Source: Stauffer, S. et al., In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the effect of pH on the solubilization of influenza A viral cores. Gel electrophoresis and protein staining reveal the progressive disassembly of the core structure under acidic conditions.

Source: Moore, M. D., et al. Alternative In Vitro Methods for the Determination of Viral Capsid Structural Integrity. J. Vis. Exp. (2017)The video demonstrates a protocol for monitoring the heat-induced aggregation of virus-like particles using dynamic light scattering (DLS). It begins with preparing a monodisperse suspension of purified particles. The sample is then loaded into a preheated DLS instrument. As the capsid proteins denature with heat, exposed hydrophobic regions cause particle...

Source: Tran, B. N., et. al. High-throughput Confocal Imaging of Quantum Dot-Conjugated SARS-CoV-2 Spike Trimers to Track Binding and Endocytosis in HEK293T Cells. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the use of quantum dot–conjugated spike protein (QD-Spike) to visualize dose-dependent viral entry in ACE2-GFP–expressing cells. Confocal imaging captures the internalization of QD-Spike via receptor-mediated endocytosis, modeling early coronavirus entry.

Source: Mateer, E., et al., Confocal Imaging of Double-Stranded RNA and Pattern Recognition Receptors in Negative-Sense RNA Virus Infection. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the confocal imaging of viral double-stranded RNA (dsRNA) and cytoplasmic pattern recognition receptors (PRRs) in virus-infected epithelial cells. It highlights how antibody-based fluorescent labeling reveals the interaction between viral replication intermediates and host immune sensors.

Source: Xu, C., et al. An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection. J. Vis. Exp. (2018).This video demonstrates the phenotyping of EBV-infected T and NK cell lines using flow cytometry, highlighting the preparation, antibody staining, and analysis steps to identify lineage-specific surface markers. It shows how marker profiles confirm distinct T-cell and NK-cell populations.

Source: Cross, T., et al. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp.(2015)This video demonstrates the isolation of bacteriophages from a soil sample. A soil sample is collected and suspended in a phage buffer and allowed to settle the sediment. The extract is filtered, and nutrients are added. A vacuum filtration is done to remove microbial contaminants. The filtrate with phages is aliquoted into flasks, and...

Source: Allaire, A., et al. Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus. J. Vis. Exp. (2015).The video demonstrates the procedure for preparing cells to assess the intracellular uptake and activity of an antiviral agent against the hepatitis C virus.

Source: Olety, B., et. al., Visualization of HIV-1 Gag Binding to Giant Unilamellar Vesicle (GUV) Membranes. J. Vis. Exp. (2016)This study demonstrates a fluorescence-based assay to observe the membrane-binding behavior of human immunodeficiency virus type-1 structural protein. Using synthetic giant unilamellar vesicles as model membranes, the assay visualizes protein recruitment and assembly, mimicking early steps of viral particle formation.

Source: Lê-Bury, G., et al. Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates live confocal imaging of HIV-1-infected human macrophages to visualize and quantify phagosome migration using GFP fluorescence and bright field tracking, providing insights into how HIV alters intracellular trafficking during Fc receptor–mediated phagocytosis.

Fuente: Vacca, O., et al. Uso del virus asociado a adenovirus como herramienta para estudiar las barreras retinianas en enfermedades. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra el procedimiento paso a paso para preparar criosecciones de retina de ratón con el fin de visualizar la permeabilidad del virus asociado a adenovirus a través de barreras retinianas alteradas.

Fuente: Vacca, O., et al. Uso del virus asociado a adenovirus como herramienta para estudiar las barreras retinianas en la enfermedad. J. Vis. Exp. (2015).Este video demuestra el método de entrega génica mediada por AAV en una retina de ratón transgénico, seguido del disección del tejido y tinción para evaluar la integridad de la membrana limitante interna.

Fuente: Moore, M. D., et al. Métodos Alternativos In Vitro para la Determinación de la Integridad Estructural del Capsido Viral. J. Vis. Exp.(2017).Este video demuestra cómo los capsidos virales purificados se someten a tratamiento térmico, se preparan y se visualizan mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) para revelar cambios estructurales y daños inducidos por el calor.

Fuente: Shah, R., et al. Imagen de fluorescencia multiplexada en célula individual para visualizar ácidos nucleicos y proteínas virales y monitorear la infección por VIH, HTLV, VHB, VHC, virus Zika e influenza. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la visualización simultánea de ADN, ARN y proteína de cápside del VIH-1 en linfocitos humanos infectados mediante hibridación de ADN ramificado e inmunofluorescencia, lo que permite un análisis detallado de las etapas de replicación viral dentro de...

Fuente: Pohl, M. O. & Stertz, S. Medición de la unión e internalización del virus de la influenza A en células A549 mediante citometría de flujo. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra el uso de un ensayo de bloqueo con estreptavidina para distinguir entre el virus de la influenza unido a la superficie y el internalizado en células epiteliales pulmonares humanas. La comparación de las señales de fluorescencia muestra que una mayor intensidad después de la incubación indica una...

Fuente: Niu, Y. D., et al. Efectividad de los bacteriófagos para el biocontrol de patógenos transmitidos por alimentos evaluada mediante configuraciones de alto rendimiento. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra un ensayo basado en microplacas para evaluar la actividad lítica de cócteles de fagos contra cultivos bacterianos de E. coli. Destaca cómo los cambios en la densidad óptica revelan la potencia del fago y la concentración necesaria para lograr la inhibición bacteriana completa.

Fuente: Dembowski, J. A., Deluca, N. A. Purificación de ADN viral para la identificación de proteínas virales y celulares asociadas. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la infección de células mamíferas en fase estacionaria con HSV-1 (virus del herpes simple-1), seguida de la replicación del genoma viral mediante la maquinaria de replicación del huésped y viral. Se incorpora un análogo sintético de nucleósido al ADN viral recién sintetizado para marcar los genomas en replicación, los cuales...

Fuente: Hiller, T. et. al. Estudio de Vectores Virales en un Modelo Hepático Tridimensional Repoblado con la Línea Celular de Carcinoma Hepatocelular Humano HepG2. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la tinción inmunohistoquímica para evaluar la transferencia génica viral en un modelo de hígado de rata recelularizado. La expresión del gen reportero, confirmada mediante la detección con anticuerpos y la co-localización con la tinción nuclear, indica una transducción viral exitosa en las...

Fuente: Bou Khalil, J. Y., et al. Una estrategia rápida para el aislamiento de nuevos Faustovirus a partir de muestras ambientales utilizando Vermamoeba vermiformis. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra la obtención de imágenes de partículas de faustovirus a partir de un cultivo de amebas infectadas mediante microscopía electrónica de transmisión. Se abarca la preparación de la rejilla, la tinción negativa con molibdato de amonio para mejorar el contraste y la visualización del virus bajo...

Fuente: Vallery, T. K. & Steitz, J. A. Hibridación fluorescente in situ cuantitativa (FISH) e inmunofluorescencia (IF) de productos génicos específicos en células infectadas con KSHV. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la hibridación fluorescente in situ para visualizar ARN viral en células infectadas por virus. Describe los pasos involucrados en la hibridación de sondas, la amplificación de la señal y la imagen confocal.

Fuente: Rghei, A. D., et al. Producción de vectores de virus asociados a adenovirus en pilas de células para estudios preclínicos en modelos animales grandes. J. Vis. Exp. (2021)El video demuestra la purificación de vectores virales adeno-asociados recombinantes (AAV) a partir de lisado crudo de hospedador utilizando una matriz de afinidad basada en heparina. Las partículas virales se unen a la heparina inmovilizada, mientras que las impurezas son eliminadas mediante lavados. Un tampón de alta...

Source: Rustad, M., et al. Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the synthesis of bacteriophages using a cell-free transcription–translation (TXTL) system. A master mix is prepared using a bacterial crude extract, an energy mix, an amino acid mix, an inhibitor for a DNA-degrading enzyme, and bacteriophage DNA, then incubated. The in vitro molecular machinery enables viral protein expression and DNA...

Source: Jamieson, T. R., et al. Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the procedure for infecting mammalian cells with green fluorescent protein (GFP)-encoding pseudovirus, monitoring viral replication and spread by fluorescence microscopy, and collecting virus-containing supernatant for downstream applications.

Source: Yuan, M., et al. A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the expansion of plaque-derived recombinant virus in adherent mammalian cells. The virus carries a fluorescent reporter in place of a virulent gene, enabling infection tracking. Infected cells are harvested for PCR verification of the genetic modification.

Source: Liu, P., et al. Use of a Recombinant Mosquito Densovirus As a Gene Delivery Vector for the Functional Analysis of Genes in Mosquito Larvae. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the process of isolating recombinant Aedes aegypti densovirus (rAaeDV) from infected mosquito-derived epithelial cells. The infected cells are collected and exposed to repeated freeze-thaw cycles for lysis. Lysate is centrifuged, and the supernatant containing viral particles is filtered, aliquoted, and...

Source: Philip, A. A., et al. Simplified Reverse Genetics Method to Recover Recombinant Rotaviruses Expressing Reporter Proteins. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the recovery of recombinant rotavirus by transfecting plasmids encoding viral genome segments into hamster kidney cells, followed by amplification in monkey epithelial cells, enabling studies of rotavirus biology, replication, and vaccine development.

Source: Prasad, M. et al. In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System. J. Vis. Exp. (2020)This video demonstrates the in vitro transformation of murine epithelial cells through viral delivery of Cre recombinase and mutation-inducing components. It outlines the steps for Cas9 activation, cancer-gene modification, and the establishment of a tumorigenic murine cell line.

Source: Ehrke-Schulz, E., et al. Cloning and Large-Scale Production of High-Capacity Adenoviral Vectors Based on the Human Adenovirus Type 5. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the large-scale amplification of high-capacity adenoviral vectors in suspension-adapted human embryonic kidney cells expressing Cre recombinase for use in gene delivery applications requiring high-titer, helper-free vector preparations.

Fuente: Chang, X., et al. Preparación de virus de influenza aviar H5 seudotipados mediante el método de transfección con fosfato de calcio y medición de la actividad neutralizante de anticuerpos. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra la producción de pseudovirus de influenza en células humanas mediante la transfección de plásmidos mediada por fosfato de calcio, lo que permite la generación segura de partículas virales de un solo ciclo para aplicaciones posteriores, como ensayos de...

Fuente: Nishitsuji, H., et al. Desarrollo de un sistema de reportero del virus de la hepatitis B para monitorear las primeras etapas del ciclo de replicación. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la producción y purificación de partículas recombinantes del virus de la hepatitis B, permitiendo preparaciones virales seguras y deficientes en replicación para estudiar los eventos iniciales de la infección y para aplicaciones de cribado de alto rendimiento de fármacos antivirales.

Fuente: Liu, P., et al. Uso de un densovirus recombinante de mosquito como vector de entrega de genes para el análisis funcional de genes en larvas de mosquito. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra el uso de densovirus de mosquito recombinantes que codifican microARN para silenciar genes específicos en larvas de mosquito. Las larvas de primer estadio infectadas producen microARN funcionales que suprimen la expresión del gen diana para estudios posteriores.

Fuente: Eggers, C. H. Manipulación genética mediada por fagos del espiroqueta de la enfermedad de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022).Este video demuestra la transducción de espiroquetas de Borrelia modificadas genéticamente mediante bacteriófagos no infecciosos, precipitados con polietilenglicol, que portan un plásmido de resistencia a la kanamicina. Tras la incubación con las bacterias, el cultivo se siembra en un medio suplementado con antibiótico. Solo las células que reciben el...

Fuente: Van Lidth de Jeude, J. F., et al. Protocolo para la transducción lentiviral y análisis posterior de organoides intestinales. J. Vis. Exp. (2015)Este video describe la transducción lentiviral de organoides intestinales de ratón a partir de una estructura similar a un cripto que contiene suspensión. Utilizando una matriz de membrana basal como andamiaje y medios suplementados con factores de crecimiento, se introducen vectores lentivirales para permitir la integración estable del...

Fuente: Chen, H., et al. Imagen de Células Vivas de la Vía de Señalización TGF-β/Smad3 In Vitro e In Vivo Mediante un Sistema de Reportero con Adenovirus. J. Vis. Exp. (2018).Este video demuestra un método para estudiar la activación de la vía SMAD en células de cáncer de mama mediante infección dual con adenovirus. Un virus entrega un gen GFP expresado constitutivamente, mientras que el otro lleva un reportero RFP bajo un promotor sensible a SMAD. Tras la estimulación con TGF-beta, las...

Fuente: Meister, T. L., et al. Un modelo de cultivo celular para producir partículas del virus de la hepatitis E con alto título. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra el proceso de aislamiento de partículas del virus de la hepatitis E (HEV) a partir de células de carcinoma hepatocelular humano transfectadas. Las partículas virales extracelulares se recogen de sobrenadantes filtrados, mientras que las partículas intracelulares se liberan sometiendo las células a ciclos repetidos de...

Fuente: Rim, Y. A., et al. Generación de células madre pluripotentes inducidas a partir de células sanguíneas utilizando virus Sendai y centrifugación. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra la generación de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) a partir de células mononucleares de sangre periférica humana mediante la reprogramación mediada por virus Sendai. Los factores de transcripción virales activan redes de pluripotencia y suprimen genes de linaje, permitiendo que un subconjunto...

Fuente: Ehrke-Schulz, E., et al. Clonación y Producción a Gran Escala de Vectores Adenovirales de Alta Capacidad Basados en el Adenovirus Humano Tipo 5. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la purificación de vectores adenovirales de alta capacidad mediante ultracentrifugación en gradiente de cloruro de cesio, lo que permite la separación de viriones que contienen el genoma para aplicaciones en la entrega de genes, caracterización de vectores y estudios terapéuticos preclínicos.

Fuente: Lu, A., et al. Expresión de transgenes virales en corazones de roedores y evaluación del riesgo de arritmia cardíaca. J. Vis. Exp. (2022)El video demuestra un método para la inyección intramiocárdica guiada por ultrasonido de un vector viral recombinante en un modelo murino. Esta técnica permite la entrega dirigida de genes al corazón para estudiar los efectos de la expresión del transgen en la función cardíaca.

Fuente: Hiller, T., et al. Estudio de Vectores Virales en un Modelo de Hígado Tridimensional Repoblado con la Línea Celular de Carcinoma Hepatocelular Humano HepG2. J. Vis. Exp., (2016)Este video demuestra la entrega de genes mediada por virus adenoasociados en un andamio de hígado de rata humanizado. El vector entrega un transgén que codifica un reportero fluorescente y un ARN de silenciamiento génico a las células hepáticas mediante endocitosis mediada por receptores. Este modelo permite una...

Fuente: Kubala, M. H. & DeClerck, Y. A. Silenciamiento condicional de la expresión génica en líneas celulares de cáncer para estudiar la reclutamiento de monocitos/macrófagos al microambiente tumoral. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la generación de líneas celulares cancerosas con inhibición genética condicional utilizando un sistema de ARNip inducible por Tet basado en lentivirus. Se describen los pasos para la transducción viral, la selección con antibióticos y el silenciamiento...

Fuente: Ding, J., et al. Preparación de rAAV9 para sobreexpresar o silenciar genes en corazones de ratón. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la producción de partículas de virus adenoasociado recombinante mediante la transfección de plásmidos en células de mamífero. Destaca la expresión coordinada de las proteínas Rep, Cap y helper que impulsan la replicación del genoma viral y el ensamblaje de la cápside dentro del núcleo.

Fuente: McAllister, S. C., Hanson, R. S., et al. Un modelo in vitro para el estudio de la transformación celular por el herpesvirus del sarcoma de Kaposi. J. Vis. Exp.(2017)Este video demuestra la transducción retroviral de células endoteliales primarias con oncogenes HPV16 E6/E7. Los oncogenes integrados inactivan los supresores tumorales p53 y Rb, prolongando la longevidad celular. La selección con G418 enriquece las células transducidas, obteniendo cultivos endoteliales inmortalizados...

Fuente: Koza, P., et al. Generación de Ratones Transgénicos utilizando un Enfoque con Vector Lentiviral. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la administración asistida por microinyección de vectores lentivirales en embriones de rata fertilizados para lograr la integración estable de transgenes en la generación de ratas transgénicas.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates a luciferase-based pseudovirus titration assay to determine the optimal target cell density for maximum infection. By comparing luminescence across cell densities, the method ensures high assay sensitivity and reproducibility for downstream applications.

Source: Chang, X., et al. Preparation of Pseudo-Typed H5 Avian Influenza Viruses with Calcium Phosphate Transfection Method and Measurement of Antibody Neutralizing Activity. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates a luciferase-based assay to quantify pseudovirus infection in epithelial cells. The pseudovirus encodes the luciferase gene, which is expressed in infected cells. After washing, and cells are incubated with lysis buffer at an ultra-low temperature, and then thawed to induce lysis.

Source: Klaus, J. P. et al. Highly Sensitive Assay for Measurement of Arenavirus-cell Attachment. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the extraction of viral RNA from surface-bound virions on epithelial cells using silica spin columns. The method includes chemical lysis, RNA stabilization, and membrane-based purification for downstream quantification of virus-cell attachment.

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates the procedure for quantifying Hepatitis C viral RNA using quantitative reverse transcription PCR to measure viral load in infected cell cultures.

Source: Kadoya, S., Sano, D. Assays for the Specific Growth Rate and Cell-binding Ability of Rotavirus. J. Vis. Exp. (2019).This video demonstrates the use of a plaque assay to assess the rotavirus growth curve. The method involves infecting host cells with diluted virus, overlaying with agarose to restrict spread, and staining to visualize plaques formed by viral replication. By counting plaque-forming units at defined time points, the resulting growth curve reveals the lag, exponential, and...

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Source: Scarborough, R. J., et al. Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy. J. Vis. Exp. (2016).This video demonstrates a reverse transcriptase (RT) assay to assess the effect of a test RNA on virus-like particle (VLP) production. Cells are co-transfected with plasmids, and RT activity is measured as a quantitative indicator of VLP output. A decrease in RT activity reflects suppression of viral gene expression by the test RNA.

Source: Manocheewa, S., et al. Pairwise Growth Competition Assay for Determining the Replication Fitness of Human Immunodeficiency Viruses. J. Vis. Exp. (2015)The video demonstrates the procedure for a growth competition assay to measure the relative replication fitness of two viral strains by comparing their replication in human immune cells.

Fuente: Vijayraghavan, S., et al. Protocolo para la Producción de Vectores Lentivirales Deficientes en Integrasa para Interrupción Genética Mediada por CRISPR/Cas9 en Células en División. J. Vis. Exp. (2017).Este video demuestra el uso de un ELISA de p24 para estimar los títulos virales de vectores lentivirales. El ensayo consiste en lisar las partículas virales para liberar p24, capturarla con anticuerpos específicos y detectarla mediante un sistema ligado a peroxidasa que produce un cambio de...

Fuente: Krishnamurthi, R., et al. Comprensión del impacto de los bacteriófagos templados sobre sus lisógenos mediante transcriptómica. J. Vis. Exp. (2024).Este video demuestra la enumeración temporal de la inducción espontánea de fagos en Pseudomonas aeruginosa lisogénica mediante la cuantificación de células bacterianas viables (UFC) y partículas fágicas infecciosas (UFPl) a lo largo del tiempo. Al tomar muestras en intervalos definidos durante el crecimiento y analizar tanto la formación de...

Source: Frias-De-Diego and A., Crisci, E. Use of Crystal Violet to Improve Visual Cytopathic Effect-based Reading for Viral Titration using TCID50 Assays. J. Vis. Exp., (2022)This video demonstrates a crystal violet staining method to visualize cytopathic effects in virus-infected cell cultures. The pattern of stained and unstained wells across serial dilutions enables rapid, cost-effective estimation of the viral infectious dose.