Visualización de nanopartículas del virus de la hepatitis E mediante microscopía electrónica de transmisión

Resumen

Fuente: Chen, C. C., et al. Funcionalización de la Superficie de Nanopartículas del Virus de la Hepatitis E Mediante Métodos de Conjugación Química. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra la preparación y tinción negativa de nanopartículas similares al virus de la hepatitis E para su visualización mediante microscopía electrónica de transmisión. El método resalta la integridad estructural de las partículas autoensambladas que contienen únicamente la cápside, confirmando su uniformidad y pureza mediante imágenes de alta resolución.

Protocolo

1. Observación de las nanopartículas del virus de la hepatitis E (HEVNPs) mediante microscopio electrónico de transmisión (TEM)
   1. Prepare o diluya las muestras de HEVNP a 0,5 - 2 mg/mL con ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES) 10 mM, pH 6,2, para la obtención de imágenes mediante TEM.
   2. Ionicen las rejillas recubiertas de carbono con una descarga de resplandor de 40 mA durante 30 s para producir una superficie de carbono hidrófila. El equipo de descarga de resplandor se describe en la Tabla de Materiales.
      NOTA: La superficie de carbono hidrófila de las rejillas solo puede mantenerse durante 30 min tras el tratamiento con descarga de resplandor.
   3. Sujete con pinzas y añada 2 µL de muestra de HEVNP a la rejilla, espere entre 15 y 30 s, y seque con papel de filtro.
   4. Lave inmediatamente la rejilla con ddH₂0 y seque con papel de filtro.
   5. Añada inmediatamente 2 µL de acetato de uranilo al 2% a la rejilla, espere 15 s y luego seque con papel de filtro. Seque las rejillas de muestra colocándolas en un armario desecador electrónico deshumidificador durante toda la noche.
   6. Transfiera la rejilla a un TEM y obtenga imágenes con un aumento de 10-80k. Las HEVNPs aparecen en el TEM como proteínas icosaédricas vacías de aproximadamente 27 nm de diámetro, debido a la ausencia de ARN viral.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Hidrato de MES	Sigma-Aldrich Chemical Co	M8250-250G	MES
Generador de descarga luminiscente EMS	Electron Microscopy Science		generador de descarga luminiscente