La evaluación de las propiedades de señalización de ectodérmica epitelio durante el desarrollo craneofacial

Summary

En este artículo se describe una técnica de trasplante de tejido que se diseñó para probar la señalización y las propiedades de los patrones de la superficie del ectodermo cefálico durante el desarrollo craneofacial.

Abstract

La accesibilidad de los embriones de aves ha ayudado a los embriólogos experimentales entender el destino de las células durante el desarrollo y el papel de las interacciones de los tejidos que regulan los patrones y la morfogénesis de los vertebrados (por ejemplo, ^{1, 2, 3, 4).} Aquí, se expone un método que explota esta accesibilidad a la prueba de la señalización y las propiedades de los patrones de tejidos del ectodermo durante el desarrollo facial. En estos experimentos, se crea la codorniz-chick chick ⁵ o ⁶ quimeras de ratón mediante el trasplante de la superficie ectodermo cefálico que cubre la mandíbula superior de la codorniz o el ratón sobre cualquiera de la misma región o de una región ectópica de embriones de pollo. El uso de la codorniz como tejido de un donante para el trasplante en los pollos se ha desarrollado para tomar ventaja de un marcador nucleolar presente en la codorniz, pero no las células de pollo, lo que permite a los investigadores distinguir anfitrión y tejidos de donantes ^7. Del mismo modo, un elemento repetitivo está presente en el genoma del ratón y se expresa doquier, lo que nos permite distinguir anfitrión y tejidos de donantes en el ratón-chick quimeras ^8. El uso de ectodermo ratón como donantes de tejidos en gran medida ampliar nuestra comprensión de estas interacciones de tejidos, ya que esto nos permitirá poner a prueba las propiedades de señalización del ectodermo derivan de varios embriones mutantes.

Protocol

1. Preparación del tejido de un donante

1. Preparar medios de cultivo, afilar pernos de vidrio, afilar agujas de tungsteno.
2. Recoger embrión a partir de cáscara, lavado en PBS helado.
   1. Con una jeringa de 10 ml y una aguja de calibre 18 extraer 1,0 ml de albúmina en la punta de la cáscara del huevo.
   2. Haz un pequeño agujero en la parte superior de la misma utilizando el punto de tijeras, y luego se corta una abertura circular para exponer el embrión
3. Quitar la cabeza y el lugar en DMEM (libre de suero, la temperatura ambiente)
4. Diseccionar proceso frontonasal del embrión (o en el sitio de otro....

Discussion

El uso de este método de trasplante nos ha permitido determinar que el ectodermo contiene información de señalización que regula la polaridad dorsoventral y extensión proximodistal de la mandíbula superior. La similitud de resultados cuando se utiliza la codorniz o ectodermo del ratón, y la conservación de las señales moleculares en este tejido, entre muchas especies de ^6,11 indica que este es un centro altamente conservadas de señalización entre los vertebrados. Por otra parte, otros investigadores han utili.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Tektronix, Inc.
DMEM	Universidad de California - San Francisco	CCFDA003
BSA	Sigma-Aldrich	A7906
Dispasa	GIBCO, de Life Technologies	17105-041
35x10 mm Placa de Petri	Falcon BD	1008
No. 5 Pinzas Dumont	Fine Science Tools	11252-20
Tijeras	Herramientas de ciencia fina	14058-11
Tijeras de resorte	Herramientas de ciencia fina	15010-11
Portaagujas	Herramientas de ciencia fina	26016-12
Aguja de tungsteno	Herramientas de ciencia fina	26000
Tubo microcapilar	Drummond Scientific	3-000-225-G
Pasteur Pipets	Fisher Scientific	13-678-6B
Tijeras de resorte	Fine Science Tools	15010-11
Portacuchillas Fine	Science Tools	10052-11
Hoja de afeitar	Fine Science Tools	10050-00