Method Article

Conteo de células madre neurales humanas

DOI:

10.3791/262

August 22nd, 2007

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El conocimiento del número exacto de células viables se requiere para muchos manipulaciones de cultivo de tejidos. Este protocolo describe cómo diferenciar entre células vivas y muertas y cuantificar las células usando un hemocitómetro. A pesar de que describe contar humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs), que puede ser utilizado para otros tipos celulares.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

El conocimiento del número exacto de células viables en un determinado volumen de una suspensión celular que se requiere para las manipulaciones rutinarias de cultivo de tejidos, como las células de revestimiento de inmunocitoquímica o para transfecciones celulares. Este protocolo describe un método sencillo y rápido para diferenciar entre células vivas y muertas y la cuantificación de la concentración celular y el número total de células con un hemocitómetro. Este procedimiento requiere en primer lugar separar las células de la superficie de crecimiento y resuspensión de ellos en los medios de comunicación. A continuación, las células se diluyen en una solución de azul tripán (idealmente a una concentración que dará a 20-50 células por cuadrante) y se coloca en el hemocitómetro. Por último, el promedio de los conteos de células viables en varios cuadrantes seleccionados al azar, dividiendo el promedio por el volumen de un cuadrante de 1 mm 2 (0,1 l) y multiplicar por el factor de dilución da el número de células por l. Al multiplicar esta concentración de células por el volumen total en l da el número total de células. Este protocolo describe contar humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs), pero también se puede utilizar para muchos tipos de células.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pases células madre neurales humanas

Nota: Consulte la pases Humanos células troncales nerviosas artículo sobre cómo separar y volver a suspender las células. https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263

Preparación de la suspensión celular para el recuento

  1. Lugar 25 l de 0,4% de la solución azul de tripano y 20 l de los medios de comunicación celular en un tubo eppendorf.
  2. Resuspender las células para ser contadas golpeando suavemente el tubo que contiene las células en un v....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este protocolo describe de una manera sencilla y rápida para determinar la concentración de células para una variedad de experimentos con las células. Utilizando el método abreviado descritas en 3D, una forma rápida y precisa de determinar la concentración de células y el número total de células en un volumen determinado.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Los autores desean agradecer al Dr. Philip H. Schwartz de la Comisión Nacional de Recursos Humanos de las células madre neurales en el Hospital Infantil s, Condado de Orange el Instituto de Investigación para proporcionar culturas hNSPC.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Herramienta de hemacitómetro de contraste de faseHausser Scientific02-671-54Distribuido por Fisher bajo el catálogo indicado #
Trypan Blue Stain 0.4%ReactivoGIBCO, por Life Technologies15250-061Distribuido por Invitrogen bajo el catálogo indicado #

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (2007).
  2. Caprette, D. avidR. Using a Hemacytometer. BioEd Online. ,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hemacytometer CountingTrypan Blue ExclusionCell Viability AssayHuman Neural Stem CellsCell Concentration CalculationDilution Factor MethodPhase Contrast MicroscopyLive Dead Cell DifferentiationCell Suspension PreparationQuadrant Cell Counting

Related Articles