Artículo de método

El estudio de las trayectorias celular Rolling en los patrones del receptor asimétrica

DOI:

10.3791/2640

13 de febrero de 2011

En este artículo

Resumen

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Se describe un protocolo para observar y analizar las trayectorias de células rodando por patrones asimétricos receptor de sustratos. Los datos resultantes son útiles para la ingeniería de patrones receptor sustratos para etiquetas sin separación celular y el análisis.

Resumen

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El desplazamiento lateral de las células ortogonal a una corriente de flujo moviendo en los patrones de los receptores asimétrica presenta una oportunidad para el desarrollo de nuevos dispositivos para el sello libre de separación y análisis de las células 1. Estos dispositivos pueden usar el desplazamiento lateral de separación de flujo continuo, o los patrones de los receptores que modulan la adhesión para distinguir entre fenotipos de células diferentes o niveles de expresión del receptor. Comprender la naturaleza de las trayectorias de células rodando por los receptores de dibujos sustratos es necesario para la ingeniería de los soportes y el diseño de estos dispositivos.

Este sentido, demuestran un protocolo para el estudio de las trayectorias de células rodando por los patrones asimétricos que el apoyo de los receptores de adhesión celular móvil 2. Bien definida, m escala los patrones de P-selectina receptores fueron fabricados utilizando impresión por microcontacto en oro revestida de diapositivas que se han incorporado en una cámara de flujo. HL60 células que expresan el ligando PSGL-1 3 se fluyó a través de un campo de las líneas de estampado y se visualizaron en un microscopio de campo claro invertida. Las células laminadas y seguimiento a lo largo de los bordes inclinados de los patrones, lo que resulta en una desviación lateral. Cada celda generalmente rodó a una cierta distancia a lo largo de los bordes del patrón (definido como la duración de seguimiento de borde), separado de la orilla, y volver a colocar a un patrón descendente. A pesar de esta separación hace que sea difícil de rastrear toda la trayectoria de una célula de entrada a la salida de la cámara de flujo, las partículas de seguimiento de software se utilizó para analizar el rendimiento y las trayectorias de rodadura de las células durante el tiempo en que se movían en un solo receptor con dibujos de línea. Las trayectorias fueron examinados para obtener distribuciones de las velocidades de balanceo de células y la longitud de borde de rastreo para cada celda de diferentes modelos.

Este protocolo es útil para la cuantificación de las trayectorias de células rodando en los patrones de los receptores y sobre estos parámetros de ingeniería tales como el ángulo de patrones y esfuerzo cortante. Estos datos serán útiles para el diseño de dispositivos de microfluídica para el sello libre de separación celular y el análisis.

Protocolo

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1. HL60 celular móvil

1.1. Fabricación de sustratos con dibujos.

  1. Utilizando impresión por microcontacto (μCP) 4-7 para alternar las monocapas autoensambladas (SAMs) de las moléculas de PEG en el portaobjetos de vidrio recubierto de oro: Fabricar microcontacto impresión polidimetilsiloxano (PDMS) sellos que definen los patrones del receptor con un ángulo de inclinación de α = 10 ° por un SU-8 proceso de moldeo. Limpie la superficie de oro con una solución de pirañas (3:1 mezcla de ácido sulfúrico al 30% de peróxido de hidrógeno) durante 20 minutos y luego enjuague la superficie con abundante agua DI a 24,5 ° C antes de s....

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Discusión

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Se ha descrito un protocolo para examinar células trayectorias rodando por patrones asimétricos receptor de las superficies fabricadas con impresión por microcontacto 2. Las imágenes de microscopio óptico de la superficie de estampado que muestra un claro contraste entre el PEG y áreas de P-selectina se puede utilizar para confirmar si es sellado con éxito. Los bordes afilados, directamente se puede observar cuando el sellado se realiza bien. Presionando duro de la marca puede dar lugar a la deformación que m.......

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Divulgaciones

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No hay conflictos de interés declarado.

Agradecimientos

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Este proyecto fue apoyado por el Centro de Innovación Tecnológica Deshpande en el MIT (RK y JMK) y el premio CARRERA NSF 0952493 de RK a través del programa de Química y Biológica de separaciones. Damos las gracias al Instituto de Nanotecnologías Soldado (ISN) y el Laboratorio de Tecnología de Microsistemas (MTL) en el MIT para el uso de sus instalaciones.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Células leucémicas promielocíticas humanasATCCCCL-240HL60 cells
Portaobjetos de vidrio recubiertos de oroEMFTA134Gold slides
(1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol)Sigma-Aldrich674508PEG
P-selectina humana recombinanteR&D SystemsADP3-050P-selectin
Albúmina sérica bovinaRockland ImmunochemicalsBSA-50BSA
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco’s Mediatech, Inc.21-030DPBS
Ácido sulfúrico Sigma-Aldrich339741
Peróxido de hidrógenoSigma-Aldrich316989

Referencias

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  1. Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors. Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).
  2. Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R.

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Etiquetas

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