Se describe un protocolo para la microfabricación del dispositivo de generación de gradiente de microfluidos que puede generar gradientes espaciales y temporales bien definidos microambiente. En este enfoque, el dispositivo de microfluidos gradiente de generación se pueden utilizar para estudiar la migración celular dirigida, la embriogénesis, la cicatrización de heridas y la metástasis del cáncer.
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Artículo de método
Un dispositivo de microfluidos gradiente de generación de Biología Celular
En este artículo
Resumen
Resumen
La fabricación y el funcionamiento de un dispositivo de generación de gradiente de microfluidos para estudiar el comportamiento celular se describe. Una plataforma de microfluidos es una herramienta que permite experimental, porque se puede manipular con precisión los flujos de fluidos, permiten experimentos de alto rendimiento, y la creación de empleos estables gradientes de concentración soluble. En comparación con los generadores convencionales de gradiente, el poli (dimetilsiloxano) (PDMS) los dispositivos de microfluidos basada puede generar gradientes de concentración estable de factores de crecimiento con perfiles bien definidos. En este caso, hemos desarrollado sencilla la generación de gradiente dispositivos de microfluidos con tres entradas separadas. Tres microcanales combinan en un microcanal para generar gradientes de concentración. La estabilidad y la forma de gradientes de factor de crecimiento fueron confirmados por fluoresceína isothyiocyanate (FITC)-dextrano con un peso molecular similar a la del factor de crecimiento epidérmico (EGF). El uso de este dispositivo de microfluidos, hemos demostrado que los fibroblastos expuestos a gradientes de concentración de EGF emigraron hacia una mayor concentración. La orientación direccional de la migración celular y la motilidad de las células que migran se evaluó cuantitativamente por análisis de la célula de seguimiento. Por lo tanto, este dispositivo de microfluidos gradiente de generación podrían ser útiles para estudiar y analizar el comportamiento de las células que migran.
Protocolo
A. microfabricación del dispositivo de generación de gradiente de microfluidos
- La oblea de silicio se trata con plasma de oxígeno reactivo (5 min a 30 W, Harrick Científico, NY).
- Fotosensible negativa (SU-8 50, Microchem, MA) es spin-revestido a 1000 rpm durante 1 minuto en una oblea de silicio.
- La oblea es suave al horno a 65 ° C durante 10 minutos y posteriormente a 95 ° C durante 30 minutos en una placa calefactora.
- La oblea se expone a la luz UV (200W) durante 3 minutos a través de una máscara de transparencia con una dimensión mínima de 30 micras.
- La oblea es posterior al horno a 65 ° C durante 1 minuto y 95 ° C....
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Discusión
Las células expuestas a los gradientes de concentración estable de EGF en un dispositivo de microfluidos emigraron hacia una mayor concentración. La orientación direccional de la migración celular, el índice de quimiotaxis, la motilidad de las células que migran son investigados por el análisis de la célula de seguimiento. Por lo tanto, esta plataforma de generación de gradiente de microfluidos podría ser útil para el estudio de la metástasis del cáncer, la embriogénesis, y guiado de los axones.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Dextrano-FITC | Reactivo | Sigma-Aldrich | FD10S | Dextrano conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC) (10 kD) |
| hr-EGF | Invitrogen | 13247-051 | Factor de crecimiento epidérmico recombinante humano | |
| PDMS | K.R. Anderson Co. | 2065622 | Polímero de (dimetilsiloxano) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8,6 lb) | |
| Fotorresistente negativo | MicroChem Corp. | SU-8 50 | ||
| Oblea de Si | Oblea de silicio, 4 pulgadas | |||
| Placas de Petri | ||||
| Tubo de polietileno | BD Biosciences | PE 20 | ||
| PBS | Invitrogen | |||
| Fibronectina | ||||
| NIH 3T3 | línea celular | células fibroblastos | ||
| Microscopio invertido | Nikon Instruments | TE 2000 |
Referencias
- Jeon, N. L., Baskaran, H., Dertinger, S. K. W., Whitesides, G. M., Van de Water, L., Toner, M. Neutrophil chemotaxis in linear and complex gradients of interleukin-8 formed in a microfabricated device. Nat. Biotechnol. 20, 826-830 (2002).
- Lin, F., Nguyen, C. M., Wang, S. J., Saadi, W., Gross, S. P., Jeon, N. L.
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Reimpresiones y permisos
