Un dispositivo de microfluidos gradiente de generación de Biología Celular

Summary

Se describe un protocolo para la microfabricación del dispositivo de generación de gradiente de microfluidos que puede generar gradientes espaciales y temporales bien definidos microambiente. En este enfoque, el dispositivo de microfluidos gradiente de generación se pueden utilizar para estudiar la migración celular dirigida, la embriogénesis, la cicatrización de heridas y la metástasis del cáncer.

Abstract

La fabricación y el funcionamiento de un dispositivo de generación de gradiente de microfluidos para estudiar el comportamiento celular se describe. Una plataforma de microfluidos es una herramienta que permite experimental, porque se puede manipular con precisión los flujos de fluidos, permiten experimentos de alto rendimiento, y la creación de empleos estables gradientes de concentración soluble. En comparación con los generadores convencionales de gradiente, el poli (dimetilsiloxano) (PDMS) los dispositivos de microfluidos basada puede generar gradientes de concentración estable de factores de crecimiento con perfiles bien definidos. En este caso, hemos desarrollado sencilla la generación de gradiente dispositivos de microfluidos con tres entradas separadas. Tres microcanales combinan en un microcanal para generar gradientes de concentración. La estabilidad y la forma de gradientes de factor de crecimiento fueron confirmados por fluoresceína isothyiocyanate (FITC)-dextrano con un peso molecular similar a la del factor de crecimiento epidérmico (EGF). El uso de este dispositivo de microfluidos, hemos demostrado que los fibroblastos expuestos a gradientes de concentración de EGF emigraron hacia una mayor concentración. La orientación direccional de la migración celular y la motilidad de las células que migran se evaluó cuantitativamente por análisis de la célula de seguimiento. Por lo tanto, este dispositivo de microfluidos gradiente de generación podrían ser útiles para estudiar y analizar el comportamiento de las células que migran.

Protocol

A. microfabricación del dispositivo de generación de gradiente de microfluidos

1. La oblea de silicio se trata con plasma de oxígeno reactivo (5 min a 30 W, Harrick Científico, NY).
2. Fotosensible negativa (SU-8 50, Microchem, MA) es spin-revestido a 1000 rpm durante 1 minuto en una oblea de silicio.
3. La oblea es suave al horno a 65 ° C durante 10 minutos y posteriormente a 95 ° C durante 30 minutos en una placa calefactora.
4. La oblea se expone a la luz UV (200W) durante 3 minutos a través de una máscara de transparencia con una dimensión mínima de 30 micras.
5. La oblea es posterior al horno a 65 ° C durante 1 minuto y 95 ° C....

Discussion

Las células expuestas a los gradientes de concentración estable de EGF en un dispositivo de microfluidos emigraron hacia una mayor concentración. La orientación direccional de la migración celular, el índice de quimiotaxis, la motilidad de las células que migran son investigados por el análisis de la célula de seguimiento. Por lo tanto, esta plataforma de generación de gradiente de microfluidos podría ser útil para el estudio de la metástasis del cáncer, la embriogénesis, y guiado de los axones.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reactivo Dextrano-FITC		Sigma-Aldrich	FD10S	Isotiocianato de fluoresceína (FITC) conjugado-dextrano (10kD)
hr-EGF		Invitrogen	13247-051	recombinante humano Factor de crecimiento epidérmico
PDMS		K.R. Anderson Co.	2065622	Poly(dimetilsiloxano) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb)
Fotorresistencia		MicroChem Corp.	SU-8 50
Oblea de silicona Oblea				silicona,
placas
	polietileno	BD Biosciences	PE 20
PBS		Invitrogen
Fibronectina
NIH 3T3	línea			Células de fibroblastos
Microscopio		Nikon Instruments	TE 2000