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Aislamiento de células mesoteliales: una técnica para aislar células mesoteliales primarias de muestras de tejido de epiplón humano

30 de abril de 2023

En este artículo

Resumen

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Fuente: Peters, P. N. et al. Modelando los primeros pasos de la diseminación del cáncer de ovario en un cultivo organotípico de la cavidad peritoneal humana. J. Vis. Exp. (2015)

Este video describe el protocolo para aislar células mesoteliales humanas primarias del espécimen de epiplón humano. Las células mesoteliales se pueden usar para establecer un modelo de cáncer de ovario in vitro para investigar la adhesión, invasión y proliferación de las células de cáncer de ovario.

Protocolo

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Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Aislamiento y cultivo de células estromales primarias no transformadas

  1. Recolección y preparación de tejido humano.
    1. Obtener muestras de epiplón humano, de 2 cm3, extraídas durante una cirugía abdominal, e inmediatamente sumergir el tejido en solución salina tamponada con fosfato RT (PBS) (Figura 1A). Un pedazo de epiplón de 3 c....

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Resultados

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Figura 1. Aislamiento de células omentales humanas primarias. (A) Se recolecta un pedazo de epiplón en la cirugía en PBS y se transporta al laboratorio. El tejido se granula a 0,5 x g x 3 min y se transfiere a PBS fresco. (B) El trozo de epiplón se transfiere a una placa de Petri de 10 cm, se lava con PBS, y se utilizan bistu.......

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Divulgaciones

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No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
PbsFisher CientíficoSH3001304
Hojas de afeitar de un solo filoFisher Científico12-640
Platos de cultivo de 15 cmBD Biociencias353025
Suero fetal bovino (FBS)Tecnologías de la Vida16000044_3616914956
DMEM con L-GlutaminaCorning10-013-CV
Vitaminas MEMCorning25-020-CL
MEM Aminoácidos no esencialesCorning25-025-CI
Penicilina-Estreptomicina Corning30-002-CI
sacudidorTermo-FisherMaxQ 4450
centrífugaEppendorf5702
incubadoraTermo-FisherIncubadora de CO2 con camisa de agua Forma Serie II modelo 3100
Frascos T-75BD Biociencias353136
Frascos T-175BD Biociencias353112
Puntas de pipetaLluviaP2, P10, P20, P200 y P1000
microscopioZeissAxiovert 200m
Anticuerpo anti-integrina αVβ3, clon LM609EMD MilliporeMAB1976
Beta 1OncosinergiaOS2966
Alfa 5 [CD49e]ID Pharmingen555615
Beta 4 [CD104]EMD MilliporeMAB 2058
Puntas de pipetaCorningPuntas filtradas P2, P10, P20, P200 y P1000
Matraz de vidrio

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Etiquetas

Mesothelial Cell IsolationHuman Omentum TissuePrimary Mesothelial CellsTissue MincingDensity SeparationCell CentrifugationGrowth Medium IncubationLight Microscopy ObservationCytokeratin 8 ExpressionVimentin Expression

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