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Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Inyección intraperitoneal de células
NOTA: En nuestros experimentos, los ratones se manipulan en un flujo de aire laminar o en una cabina de bioseguridad dentro de nuestras instalaciones de barrera para limitar el riesgo de exposición a patógenos. Con el fin de demostrar claramente esta técnica, los procedimientos que se muestran en el video adjunto se llevaron a cabo en un laboratorio aprobado para el trabajo con animales, esta técnica en particular no requiere que los animales estén bajo anestesia. Bajo protocolos aprobados, realizar esta técnica en animales vivos. Utilice cepas apropiadas de ratones para este estudio. Por ejemplo: utilizar ratones desnudos atímicos inmunodeprimidos para el estudio de la colonización de células de cáncer de ovario humano (SKOV3ip.1 y HeyA8); utilizar ratones C57BL/6 inmunocompetentes para el estudio de la colonización de células de cáncer de ovario (ID8) en ratones.
- Cargue 500 μl de suspensión unicelular de células de cáncer de ovario en una jeringa y colóquela en la aguja estéril de 25 g con tapón. Esto reduce el cizallamiento celular antes de la inyección.
- Levante el ratón por el pescuezo y sujete la cola con la palma y el índice y fije la pata trasera izquierda entre el dedo anular y meñique (cuando el ratón está sujeto con la mano izquierda).
NOTA: Para evitar traumatismos en los órganos abdominales, sujete bien al ratón para que no pueda moverse durante la inyección.
- Imagina una línea que atraviesa el abdomen justo por encima de las rodillas y ubica un punto en el lado derecho del animal y cerca de la línea media. El punto de entrada es craneal y ligeramente medial del último pezón.
nota: Insertar la aguja en el lado derecho del ratón evita el ciego y reduce el riesgo de perforar los intestinos.
- Inserte la aguja en la región lateral inferior del abdomen de los ratones hasta una profundidad de aproximadamente 0,5 cm. Tire hacia atrás del émbolo para confirmar que la aguja no ha penetrado en un vaso sanguíneo u otros órganos peritoneales.
- Si se aspira algún líquido, deseche la jeringa (y la muestra). Un aspirado de color marrón verdoso o amarillo indica la penetración de la aguja en los intestinos o la vejiga, respectivamente.
- Inyecte la muestra con una presión lenta y constante. Retire la aguja y devuelva el ratón a su jaula. No vuelva a tapar la jeringa antes de desecharla en un recipiente afilado.
- Sacrificar ratones mediante asfixia por CO2 y extracción de órganos vitales en un momento específico después de la inyección.