Recolección de depósitos de grasa peritoneal: una técnica para estudiar la colonización por cáncer de ovario de tejidos adiposos peritoneales en modelos de ratón

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de animales para estudios experimentales

1. Permitir que los animales se aclimaten a un nuevo alojamiento y entorno, para recuperarse de los posibles efectos fisiológicos del transporte y la manipulación.
   nota: La siguiente técnica es aplicable a todas las cepas de ratones disponibles en el mercado. El número de animales que se utilizarán para un experimento depende del diseño del estudio y debe realizarse con la consulta de un estadístico.

>2. Identificación y aislamiento de depósitos de grasa peritoneal

1. Eutanasia de animales a través de una sobredosis de CO₂ y un método físico secundario para confirmar la muerte.
2. Dado que la recolección de los depósitos de grasa peritoneal constituye la extracción de órganos internos (método secundario), se debe realizar una incisión en la línea media cerca de las papilas inguinales a través de la pared peritoneal para exponer los órganos internos (Figura 1A).
3. En el caso de la grasa omental (MO), exponer el complejo omental/pancreático extendiendo el bazo desde la cavidad peritoneal con pinzas (Figura 1C). Libera el epiplón del páncreas y el bazo recortando de cerca todas las conexiones de tejido. Asegúrese de extirpar cualquier resto de tejido pancreático.
4. En el caso de la grasa gonadal (GF), utilice fórceps para levantar la grasa gonadal que rodea los ovarios y realice la extracción cortando las conexiones de tejido (Figura 1A superior derecha).
5. En el caso de la grasa uterina (UF), utilice fórceps para levantar la grasa uterina que rodea los cuernos uterinos y realice un corte de las conexiones de tejido (Figura 1A inferior derecha).
6. Para la grasa mesentérica (MF), corte la unión entre el intestino delgado y el píloro. Use fórceps para agarrar firmemente el extremo libre del intestino delgado y "pelé" lentamente de la grasa mesentérica. Libere la grasa mesentérica de la raíz mesentérica con unas tijeras de disección (Figura 1A, abajo a la izquierda).
7. En el caso de la grasa esplenoportaria (SF), levante el extremo distal del bazo con fórceps para exponer la delgada banda de tejido graso que conecta el hilio del bazo con el páncreas. Exbicir la grasa del esplenoportal liberándola primero del páncreas y luego diseccionándola cuidadosamente del bazo (Figura 1B).

Figura 1. Localizaciones y estructuras relativas de los principales depósitos adiposos peritoneales. (A)Disección anatómica macroscópica que muestra la ubicación relativa de cuatro de las cinco fuentes primarias de grasa peritoneal. Se muestran el epiplón (OM; esbozado), la grasa gonadal (GF), la grasa uterina (UF), el mesenterio (MY), el ovario (ov), los cuernos uterinos (uh) y el intestino delgado (si). (B) Grasa esplenoportal (SP; delineada) expuesta al levantar el bazo con fórceps. (C) El epiplón de ratón que se muestra diseccionado libre del páncreas para mejorar la visualización. (D)Tamaños y estructuras relativas de la grasa peritoneal extirpada; El mesenterio se muestra unido a la raíz mesentérica. (E) Evaluación histológica de la grasa peritoneal para detectar la presencia de manchas lechosas: (A) adipocitos, (MS) mancha lechosa.