Ensayo de aclaramiento mesotelial: una técnica in vitro para cuantificar la capacidad de invasión de esferoides de cáncer de ovario en monocapas de células mesoteliales

Resumen

Fuente: Davidowitz, R. A. et al. que modela los primeros pasos de la metástasis del cáncer de ovario. J. Vis. Exp.(2012)

Este video describe una técnica para medir cuantitativamente la interacción de los esferoides del cáncer de ovario con las células mesoteliales, utilizando células marcadas con fluorescencia y microscopía de video de lapso de tiempo. Este ensayo in vitro modela la interacción entre las células de cáncer de ovario en metástasis, los esferoides y las células mesoteliales que recubren la cavidad peritoneal in vivo.

Protocolo

1. Formación de esferoides de células de cáncer de ovario

1. Las células de cáncer de ovario que expresan RFP se cultivan en un medio base al 10 % (un medio de cultivo celular personalizado que contiene una mezcla 50:50 de 199 y MCDB105, 10 % de suero fetal bovino inactivado y 1 % de pen-streptococo). Para expresar RFP en células de cáncer de ovario no marcadas, transfecte las células con un plásmido que contenga RFP y seleccione las células que expresan RFP. Alternativamente, los vectores virales se pueden usar para expresar proteínas fluorescentes transitoriamente, o las células se pueden preincubar con un tinte rastreador de célula....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
OVCA433 Células de cáncer de ovario			Regalo del Dr. Dennis Slamon
Células mesoteliales ZT			Regalo del Dr. Tan Ince
Medio 199	GIBCO de Life Technologies	Año 19950
MCDB105	Aplicaciones celulares Inc.	117-500
FBS-calor inactivado	GIBCO, de Life Technologies	10082
Estreptococo en pluma	GIBCO, de Life Technologies	Año 15070
Placas de 96 pocillos	Corning	3799
Polihidroxietilmetacrilato (poli-HEMA) 192066-25G	Sigma-Aldrich		Para la solución de poli-HEMA, disuelva 6 mg de polvo de poli-HEMA en 1 ml de EtOH al 95%
EtOH	Pharmco-AAPER	111ACS200	Diluir al 95% en dH20
Campana de cultivo celular	Nuaire	NU-425-300
Incubadora de cultivo de tejidos	Thermo Fisher Scientific, Inc.	3110
Incubadora para placas de poli-HEMA 305	Instrumentos Labline	Imperial III
Centrífuga de sobremesa	Instrumentos de Heraeus	75003429/01
Plato de 6 pocillos con fondo de vidrio	Corporación MatTek.	P06G-1.5-20-F
Fibronectina	Sigma-Aldrich	F1141-1MG
Pbs	Cellgro	21-040-CV
microscopio	Instrumentos Nikon		Microscopio time-lapse de fluorescencia motorizada invertida Ti-E con sistema de enfoque perfecto integrado
lente	Instrumentos Nikon		20X-0.75 apelación numérica
Transiluminador halógeno	Instrumentos Nikon		Condensador de larga distancia de trabajo de 0,52 NA
Filtros de excitación y emisión	Chroma Technology Corp.		GFP ex 480/40, em 525/50 RFPmCherry ex 575/50 em 640/50
Trayectoria de la luz transmitida y epifluorescente	Instrumento Sutter Co.		Persianas inteligentes
Platina motorizada codificada linealmente	Instrumentos Nikon
Cámara de dispositivo acoplado cargado refrigerado	Hamamatsu Corp.	ORCA-AG
Cámara de incubación de microscopio con control de temperatura y CO2			Hecho a medida
Mesa de aislamiento de vibraciones	TMC
Software NIS-Elements	Instrumentos Nikon		Versión 3