Ensayo de organoides prostáticos: una técnica de cultivo ex vivo basada en anillos de gel de matriz para estudiar la capacidad de diferenciación de las células epiteliales de la próstata

Resumen

Fuente: Crowell, P. D. et al. Evaluación de la capacidad de diferenciación de las células epiteliales de próstata de ratón mediante cultivo de organoides. J. Vis. Exp. (2019)

En este video, demostramos el cultivo de células epiteliales de próstata aisladas de ratón utilizando una técnica de cultivo basada en anillos de gel de matriz. Este enfoque puede proporcionar información complementaria sobre la capacidad de diferenciación de las células epiteliales de próstata para formar estructuras glandulares en 3D en respuesta a la manipulación genética o farmacológica.

Protocolo

>1. Siembra de células epiteliales prostáticas clasificadas en cultivo primario de organoides de ratón — TIEMPO: 2-3 h (excluyendo la preparación de placas recubiertas de poli-HEMA)

NOTA: Las placas están recubiertas con Poly-HEMA para evitar la formación de colonias 2D en la superficie del pozo debajo del gel de la matriz. Prepare las placas recubiertas de Poly-HEMA 1 día antes de la siembra de las células epiteliales de próstata basales o luminales clasificadas en cultivo de organoides de ratón. Descongele 1 ml de alícuotas de gel de matriz de factor de crecimiento reducido, en lo sucesivo denominado gel de ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Suero fetal bovino (FBS)	sigma	F8667
Suplemento B-27 (50x), sin suero	Thermo Fisher Scientific	17504044
DMEM/F-12 avanzado	Thermo Fisher Scientific	12634010
Plato de μ de 35 mm, de altura	Ibidi	81156
Matrigel GFR Matriz de membrana	Corning	CB-40230C
Penicilina-estreptomicina (10.000 u/mL)	Thermo Fisher Scientific	15-140-122
Poli(2-hidroxietil metacrilato) (Poly-HEMA)	sigma	P3932-25G
Y-27632 diclorhidrato (inhibidor de ROCK)	Selleck Químico	S1049-50MG
A83-01	Tocris	Año 2939
(DiHidro)testosterona (5αAndrostan-17β-ol-3-ona)	sigma	A-8380
GlutaMAX	Thermo Fisher Scientific	35050061
Normocina	Thermo Fisher Scientific	ant-nr-1
EGF humano recombinante, libre de animales	PeproTech	AF-100-15
Noggin Humano Recombinante	PeproTech	120-10C
RPMI 1640 Medio, HEPES (cs de 10)	Thermo Fisher Scientific	22400105
Inhibidor de la fosfatasa Halt	Thermo Fisher Scientific	78428
Cóctel completo de inhibidores de proteasas	sigma	11836145001
Tritón X-100	sigma	X100-5ML
Desmembrador sónico	Thermo Fisher Scientific	FB120