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Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. La disección del sistema urogenital (UGS)
NOTA: El esquema se presenta en la Figura 1.
- Sacrificar a un ratón macho C57BL/6 de 3 meses de edad utilizando el método de eutanasia por inhalación de CO2 u otra técnica aprobada.
nota: Los ratones de entre 3 y 12 meses de edad pueden utilizarse con éxito para el experimento. Lo más probable es que los ratones mayores (> 6 meses) tengan más grasa alrededor del UGS, que deberá eliminarse. La identificación y separación de los lóbulos suele ser difícil en ratones menores de 3 meses. También se pueden utilizar otras cepas para el experimento.
- Coloque el ratón boca arriba y asegure las patas con alfileres para que el lado ventral del animal quede expuesto.
- Rocíe etanol al 70% en el abdomen del ratón y límpielo.
nota: No es necesario afeitar el vello del abdomen antes de la disección.
- Levanta la piel del abdomen, junto con la capa muscular, con un par de pinzas romas medianas y haz una incisión en forma de Y invertida en el abdomen con unas tijeras.
- Primero, haga una incisión recta con un par de tijeras afiladas desde justo por encima del pene hasta el esternón (Figura 2a).
- Corte desde la base de la incisión hacia cada dedo del pie, hasta los muslos (Figura 2b). Pliegue la piel hacia atrás en ambos lados y en la parte inferior para ver toda el área abdominal (Figura 2c-e).
nota: El tamaño del corte varía según la edad y el tamaño del mouse. El tamaño de la incisión recta inicial puede oscilar entre 1,5 y 4 cm, dependiendo del tamaño del ratón.
- Muévase sobre los otros órganos para exponer el UGS. Levante y mueva los intestinos de color marrón amarillento (Figura 2f). Levante las almohadillas de grasa abdominal (el tejido esponjoso blanco opaco) con pinzas y muévalas hacia los lados (Figura 2g).
nota: El UGS comprende las vesículas seminales, la uretra, la próstata, el conducto deferente (conducto deferente) y la vejiga urinaria. Se puede identificar por el característico par de arcos semicirculares de color blanco opaco (que son las vesículas seminales), con el saco vesical lleno de líquido unido a la base. El tejido translúcido ubicado justo debajo de las vesículas seminales es la próstata.
- Ubique el UGS, sujete firmemente la vejiga urinaria con pinzas romas y levante todo el UGS hacia arriba desde el abdomen del ratón><.
nota: Si la vejiga está llena, drene primero con una jeringa pequeña para proporcionar un mejor agarre con las pinzas y reducir el riesgo de ruptura de la vejiga.
- Continuando tirando de la vejiga hacia arriba, deslice un par de tijeras por debajo de la vejiga y la próstata hasta la columna vertebral y haga un corte. Corte a través de cualquier conexión restante a la cavidad abdominal (Figura 2h y 2i). Tenga cuidado de no cortar demasiado cerca del UGS para evitar cortes accidentales a través de cualquier tejido prostático.
nota: Al hacer el corte debajo del UGS, las tijeras deben insertarse completamente hasta la parte posterior del ratón, de modo que el corte también rompa la columna vertebral. Este método da como resultado el corte de casi todas las conexiones entre el UGS y la cavidad abdominal de una sola vez, lo que reduce el tiempo necesario para extraer el tejido del ratón.
- Retire el UGS y colóquelo en 2-6 mL (suficiente para cubrir el tejido) de solución salina tamponada con fosfato (PBS) o medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM, glucosa alta) en una placa de Petri de 6 cm (Figura 2j y 2k) y muévalo a un microscopio de disección (aumento de 10X)
nota: Cambie los medios de disección según sea necesario en los pasos restantes.
