Muestreo de células individuales mediante micromanipulación: una técnica para aislar células individuales de la suspensión de células cancerosas

Abstract

Fuente: Chen S. et al. Enrichment de células objetivo y amplificación del genoma completo para la caracterización de células individuales aguas abajo. J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe la técnica para aislar células individuales de un grupo de células objetivo para llevar a cabo análisis posteriores. En este método, se utiliza un micromanipulador instalado en un microscopio para el aislamiento de alta precisión de una sola célula objetivo.

Protocol

1. Muestreo de una sola célula

1. Micromanipulación
   NOTA: Para permitir aplicaciones posteriores como el análisis del genoma completo (WGA), se agregarán células individuales aisladas a 2 μL de mezcla maestra de lisis celular. Prepare una mezcla maestra de acuerdo con el número de celdas a procesar. Calcule los volúmenes adicionales de pérdida debido al pipeteo y coloque la mezcla maestra de lisis celular en hielo.
   1. Preparar la mezcla maestra de lisis celular (componentes del kit WGA, Tabla de Materiales y Reactivos). Brevemente, mezcle 2,0 μL de tampón de reacción, 1,3 μL d....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Solución salina tamponada con fosfato (1x PBS)	Thermo Fisher Scientific	10010-015
Tubos Vacutainer EDTA (o Na-heparina)	Bd	366450 (o 366480)	Se utiliza como tubo de reacción para la captura ex vivo de células diana
Pipetas Pasteur 150 mm	Volac	D810	Se utiliza para la aplicación de bajo volumen de células al C&R
Bolígrafo de grasa	Dako	S2002	Se utiliza en portaobjetos de vidrio para mantener la suspensión de la celda en su lugar
Axiovert M200 equipado con Mikromanipulator MMJ y CellTram vario	Zeiss/Eppendorf		Usa la micromanipulación a mano
Microcapilares (25 μm de diámetro), CustomTip Tipo I	Eppendorf	930001201	Se utiliza para la micromanipulación de células
Tubos de PCR de 0,2 mL	Biozym	710920