Modelado del cáncer de próstata en modelos de ratón modificados genéticamente: una técnica de edición de genes localizados mediada por CRISPR/Cas9 en células del lóbulo anterior de la próstata de ratón

Resumen

Fuente: Riedel, M. et al. Virus Entrega de guías CRISPR a la próstata murina para la alteración genética. J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe un método para editar genes específicos en células de la glándula prostática utilizando un sistema de administración basado en adenovirus. El enfoque permite la alteración ortotópica y localizada de la expresión génica utilizando la tecnología CRISPR para desarrollar nuevos modelos de ratón para el cáncer de próstata.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Transmisión del virus a la próstata murina

1. Anestesiar al animal mediante inyección intraperitoneal con una jeringa estéril de 1 mL y una aguja de 27G x 1/2". Utilice una dosis de anestesia de 0,01 mL/g de peso corporal. Si el procedimiento dura más de 30 minutos, mantenga la anestesia inyectando 1/3 de la dosis inicial cada 30 minutos.
2. Examine la profundidad anestésica evaluando la relajación muscular, el retiro del pedal y l....

Resultados

Figura 1: Ilustración del procedimiento. El procedimiento se lleva a cabo en el ratón Rosa26-LSL-Cas9-EGFP generado por Platt et al. La próstata anterior (AP) está unida a la vesícula seminal (SV). Las partículas de virus que expresan ARN guía y una proteína Cre se inyectan en la próstata anterior para alterar la expresión génica.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
B6J.129(B6N)-Gt(ROSA)26Sor^{tm1(CAG-cas9*,-} ^{EGFP)Fezh} /J ratones	El Laboratorio Jackson	26175
Jeringa de insulina U-100 de 0,5 ml	Bd	324825	para inyección de virus
Jeringa de 1 ml	Bd	300013	para inyección de anestesia
Aguja de 30 G 1/2''	Bd	304000	para inyección de anestesia
Sutura de polisorbo 6-0	Medtronic	GL889	para cerrar el peritoneo
Paño de cirugía esterilizado desechable	Múltiples proveedores
Almohadilla térmica	Múltiples proveedores
Almohadilla de preparación de povidona y yodo	Fisher Científico	06-669-70
Máquina recortadora	Esculapio	GT415	para afeitar el abdomen
Pinzas Dumont	F.S.T	11252-00
Halsey Micro Portaagujas	F.S.T	12500-12
Tijeras de iris	F.S.T	14094-11
Pinzas de patrón estrecho	F.S.T	11002-12
Pinzas de anillo	F.S.T	11106-09
Mango del sistema de clip para heridas incl. Clips	F.S.T	12030-01	para cerrar la piel
Removedor del sistema de clip para heridas	F.S.T	12030-04
1x PBS	Gibco	10010-023
Antisedán			obtenidos del animalario
Butorfanol			obtenidos del animalario
Clorhidrato de medetomidina			obtenidos del animalario
Midazolam			obtenidos del animalario
100% Etanol	Fisher Científico	22-032-103
Ungüento para los ojos	Takeda	7242
Virus (AAV, AV)	Múltiples proveedores		virus utilizado en este protocolo es una producción propia