Artículo de método

Desparafinación y rehidratación de secciones de tejido: un procedimiento de dos pasos para eliminar la cera de parafina de los portaobjetos de tejido FFPE seguido de rehidratación de tejidos

30 de abril de 2023

En este artículo

Resumen

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Fuente: Sugimoto, K. et al. Análisis de todo el genoma de la metilación del ADN en el cáncer gastrointestinal. J. Vis. Exp. (2020)

En este video, demostramos el procesamiento de FFPE o secciones incluidas en parafina fijadas en formol obtenidas de tejido tumoral gastrointestinal. Las etapas de desparafinación y rehidratación permiten el procesamiento de la muestra de tejido para aplicaciones analíticas posteriores.

Protocolo

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Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Lavar las diapositivas

  1. Prepare 10 μm de secciones sin teñir fijadas en formol e incluidas en parafina (FFPE).
  2. Coloque los portaobjetos en un portaobjetos de vidrio: use alrededor de 3-5 portaobjetos de sección transversal más grandes, a menos que el tejido sea mínimo y se necesiten más portaobjetos.
  3. Llene el portaobjetos con xileno y asegúrese de que todo el tejido del portaobjetos esté sumergido. Deje reposar durante 15 min.
  4. Pasados los 15 minutos, vierta el xileno sujetando los portaobjetos con la punta de una pipeta para que no se caigan.
  5. Vierta más xileno al mismo nivel que antes. Deje reposar durante otros 15 minutos.
  6. Después de 15 minutos, vierta el xileno nuevamente.
  7. Llene el portaobjetos con etanol al 100 % (EtOH) y asegúrese de que todo el tejido del portaobjetos esté completamente sumergido. Deje reposar durante 3 minutos.
  8. Vierta el EtOH mientras sostiene con cuidado los portaobjetos. Rellene al mismo nivel con más EtOH. Deje reposar durante 2 minutos.
  9. Vuelva a verter el EtOH y retire el portaobjetos. Colócalos con cuidado boca arriba sobre una toalla de papel limpia para que se sequen. Deje reposar durante 10 minutos.

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Divulgaciones

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No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
xileno Sigma-Aldrich214736
100% Etanol Sigma-Aldrich24194

Reimpresiones y permisos

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Etiquetas

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