Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.
1. Tinción
- Antes de continuar con la tinción, limpie cualquier exceso de soluciones alrededor del pañuelo en el portaobjetos con papel de seda.
- Coloque los portaobjetos en condiciones de temperatura y humedad ambiente para evitar que el tejido del portaobjetos se seque durante todo el proceso de tinción.
- Oxida los portaobjetos con unas gotas de permanganato de potasio durante 5 min. Asegúrese de que el volumen de permanganato de potasio sea suficiente para cubrir la sección de tejido de cada portaobjetos.
- Enjuague los portaobjetos oxidados con agua destilada en un frasco Coplin con 2-3 cambios. Observa el color azul del tejido.
- Ahora, blanquea estos portaobjetos añadiendo unas gotas de ácido oxálico durante 5 min. Asegúrate de que el volumen de ácido oxálico sea suficiente para cubrir completamente la sección de tejido de cada portaobjetos.
- Enjuague los portaobjetos sumergiéndolos en el frasco Coplin lleno de agua destilada. Realice el enjuague 2x-3x.
- Ahora, lave estos portaobjetos brevemente en alcohol al 95% y luego sumérjalos en una solución de elastina (5 g / L) durante 8-24 h.
nota: La solución de elastina es volátil y su tiempo de tinción es relativamente largo, por lo que es mejor sumergir los portaobjetos con tinción elástica en un recipiente sellado, como una botella de vidrio transparente con una tapa de sellado. La capacidad del recipiente y el volumen de la solución de elastina depende del número de portaobjetos sumergidos, siempre que permita la inmersión completa de todos los portaobjetos.
- Sumerja estos portaobjetos directamente en etanol al 95% durante 1-2 minutos para diferenciar bien cada sección de tejido.
nota: La diferenciación se refiere al cambio en la carga de la sección de tejido, lo que elimina el exceso de tinción absorbido por el tejido y hace que los colores sean más claros. Después de la tinción de la solución de elastina, las muestras no deben lavarse con agua destilada para evitar cualquier dificultad en la diferenciación. Revise microscópicamente, según sea necesario, para ver si hay manchas de fibras elásticas azul-negras y fondo gris. Es mejor diferenciar ligeramente el tejido, ya que la contratinción de Van Gieson posterior también puede extraer algo la mancha elástica.
- Enjuague completamente estos portaobjetos con agua destilada después de la diferenciación.
- Contramanche los portaobjetos en la solución de Van Gieson durante 1 min.
nota: El volumen de la solución de Van Gieson debe ser suficiente para poder sumergir completamente la sección de tejido en cada portaobjetos.
