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1. División de esferoides SBNET
>NOTA: Esto se hace para expansión y para compartir con otros investigadores.
- Utilice una pipeta P1000 para romper mecánicamente el ECM y aspirar el ECM con esferoides SBNET a un tubo estéril de 1,5 mL.
- Centrifugar a 1.000 x g a 4 °C, eliminar todo el sobrenadante y colocar el tubo en hielo.
- Agregue 2-4 veces el volumen del nuevo ECM al pellet. Mezcle el nuevo ECM con los antiguos esferoides ECM y SBNET pipeteando hacia arriba y hacia abajo 10 veces, evitando la introducción de burbujas de aire.
- Transfiera 5-20 μL de la mezcla de esferoides ECM y SBNET a una nueva placa y permita que ECM se solidifique.
- Cubra con un nuevo medio SBNET y transfiéralo a la incubadora. La tasa de recuperación es de aproximadamente el 95% al 100%.
- Para enviar esferoides SBNET a otro laboratorio, transfiera los esferoides SBNET con nuevo ECM a un matraz T25 y permita que el ECM se solidifique.
- Llene el matraz T25 con medio esferoide SBNET, enrosque bien la tapa y prepare el paquete de envío.
- Al recibir un cultivo de esferoides SBNET, retire el medio de cultivo y realice los pasos 1.1 a 1.5 para volver a colocar los esferoides SBNET en cultivo.