Seccionamiento, tinción e imágenes TEM de exosomas incrustados: un protocolo para visualizar las características estructurales de los exosomas mediante TEM

Resumen

Fuente: Jung, M. K. et al. Preparación de muestras e imágenes de exosomas mediante microscopía electrónica de transmisión. J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe la técnica para preparar una sección delgada de exosomas incrustados. Estas secciones se pueden teñir e obtener imágenes mediante microscopía electrónica de transmisión, o TEM, para estudiar las características estructurales de los exosomas.

Protocolo

1. Seccionamiento de los exosomas

1. Prepare el bloque de exosomas incorporando la muestra de exosoma purificada (obtenida del sobrenadante de cultivo de células HCT116) en una mezcla de inclusión pura de baja viscosidad.
2. Sección el bloque de exosomas con un grosor de 60 nm a través de un ultramicrótomo.
3. Doble tinción con acetato de uranilo al 2% durante 20 min y citrato de plomo durante 10 min.
   Para la solución de plomo Reynolds, agregue 1,33 g de nitrato de plomo y 1,76 g de citrato de sodio a un total de 50 ml de agua destilada.
4. Observe la red bajo microscopía electrónica de transmisión a 80 kV.
5. Haga clic en "Adquirir" y luego haga clic en "Archivo" y "Guardar como" en el sistema de cámara CCD bajo el microscopio electrónico a 80 kV. Siga los ajustes automáticos para el tiempo de exposición.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ultra-micrótomo	Leica	UCT
Acetato de uranilo	ems	22400	Producto químico peligroso
Citrato de plomo	ems	Año 17900
Microscopía electrónica de transmisión	Hitachi	H7600
Rejilla de níquel	ems	G200-NI
Rejilla de cobre	ems	G200-CU
Microscopía electrónica de transmisión	JEOL	JEM2200FS